目的探讨表皮生长因子(EGF)对人滋养细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响及其调控MMP-9的机制。方法 (1)在JEG-3滋养细胞中分别加入不同浓度的EGF(0、1、10、20ng/ml),培养24h后收集细胞待测。(2)JEG-3滋养细胞中加入含10ng/ml的EGF,分别培养0、4、12、24h后收集细胞待测。(3)根据JEG-3滋养细胞中所加成分不同分组,即无EGF组、EGF刺激组、EGF+抑制剂干预[分别加入p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580(EGF+SB203580组)或细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126(EGF+U0126组)]、抑制剂干预(分为SB203580干预组和U0126干预组)。于1%的血清DMEM培养基中培养24h,收集各组GPCR & G Protein抑制剂细胞待测。逆转录(RT)PCR技术检测JEG-3滋养细胞中MMP-9 mRNA的表达,蛋白印迹法检测JEG-3滋养细胞中MMP-9、NF-κB、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK及p-ERK蛋白表达。结果 (1)JEG-3滋养细胞中MMP-9 mRNA的表达:经不同浓度EGF处理后,JEG-3滋养细胞中MMP-9 mRNA表达水平随着EGF浓度的升高而增加,其中1、10、20ng/ml浓度EGF处理的细胞中MMP-9 mRNA表达水平(分别为0.567±0.056、1.392±0.133、1.971±0.067)与0ng/ml(0.166±0.015)分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经10ng/ml EGF处理细胞不同时间后,细胞中MMP-9 mRNA表达水平随着培养时间的延长而增加,其中培养4、12、24h的细胞中MMP-9 mRNA表达水平(分别为0.470±0.026、1.061±0.115、1.453±0.180)与0h(0.253±0.044)分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)JEG-3滋养细胞中MMP-9蛋白的表达:经不同浓度EGF处理后,JEG-3滋养细胞中MMP-9蛋白表达水平随着EGF浓度的升高而增加,其中1、10、20ng/ml浓度EGF处理的细胞中MMP-9蛋白表达水平(分别为0.043±0.012、0.085±0.008、0.142±0.015)与0ng/ml(0.004±0.001)分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经10ng/ml EGF处理细胞不同时间后,细胞中MMP-9蛋白表达水平随着处理时间的延长而增加,其中培养4、12、24h的细胞中MMP-9蛋白表达水平(分别为0.137±0.010、0.240±0.010、1.240±0.061)与0h(0.030±0.009)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)EGF对JEG-3滋养细胞中购买Crizotinibp-p38MAPK、p-ERK水平的影响:①p-p38MAPK:与无EGF组(234.1±4.1)比较,EGF刺激组的p-p38MAPK水occult HBV infection平(260.9±2.5)显著增加(P<0.05);与EGF刺激组比较,EGF+SB203580组的p-p38MAPK水平(227.9±2.4)显著下降(P<0.05)。②P-ERK:与无EGF组(453.4±5.8)比较,EGF刺激组的P-ERK水平(812.2±3.5)显著增加(P<0.05);与EGF刺激组比较,EGF+U0126组的p-ERK水平(71.0±1.2)显著下降(P<0.05)。(4)阻断p38MAPK通路对EGF处理的JEG-3滋养细胞中MMP-9和NF-κB蛋白表达的影响:与EGF刺激组(分别为1.476±0.452及0.959±0.017)比较,EGF+SB203580组的MMP-9和NF-κB蛋白表达水平(分别为0.645±0.270及0.530±0.026)均显著下降(P<0.05)。(5)阻断ERK通路对EGF处理的JEG-3滋养细胞中MMP-9和NF-κB蛋白表达的影响:与EGF刺激组(分别为2.112±0.056及0.939±0.153)比较,EGF+U0126组的MMP-9和NF-κB蛋白表达水平(分别为0.623±0.030及0.325±0.082)均显著下降(P<0.05)。结论 EGF以剂量依赖和时间依赖的方式上调人滋养细胞中MMP-9的表达;EGF通过活化p38MAPK和ERK信号通路调控滋养细胞中MMP-9的表达。