目的:通过对人视网膜色素上皮(Human retinal pigment epithelium,ARPE-19)细胞进行体外培养,建立细胞高糖模型,探究高糖是否通过氧感知通路影响对视网膜色素上皮(retinal pimedicinal marine organismsgment epithelium,RPE)细胞,探究丹黄明目汤含药血清通过氧感知通路对高糖损伤的RPE细胞的影响。方法:1.含药血清的制备:将40只雄性SD大鼠按照奇偶数随机方法,平均分为空白组、丹黄明目汤组:丹黄明目汤组用蒸馏水将丹黄明目汤煎煮液配置后灌胃。空白组等量蒸馏水灌胃。灌药7天后提取血清。2.设置不同浓度的丹黄明目汤含药血清:1/50、1/30、1/20、1/10、1/4、1/2、1/1、0(为完全培养基)。不同药物培养24小时后,筛选丹黄明目汤含药血清培养RPE细胞最大无毒浓度(TC0)。3.丹黄明目汤对高糖损伤的RPE细胞的干预研究:将细胞分为4组,分别为:空白组、高糖模型组、HIF抑制剂组、丹黄明目汤组。药物作用24小时后,在显微镜下观察各组细胞形态,CCK-8法检测各组细胞活力。4.流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率、活性氧自由基(ROS)荧光强度;ELISA法检测细胞内脯氨酰羟化酶(PHD3)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及乳酸浓度,RT-q PCR检测的基因表达水平,WB(Western Blotting)检测ERK2、Raf1、HIF2α、NDRG3的蛋白表达量。结果:1.通过CCK-8法检测丹黄明目汤含药血清的TC0为2%。2.通过光学倒置光学显微镜观察培养48h后各组细胞形态:空白组的细胞形态正常,生长良好;与空白组相比,高糖模型组的细胞生长状态差,形态不规则,细胞出现胞体发亮、圆缩等现象;与高糖模型组相较,HIF抑制剂组和丹黄明目汤组的细胞形态较高糖模型组显著改善。3.CCK-8法检测各组细胞活力:空白组、高糖模型组、HIF抑制剂组、丹黄明目汤组细胞活力分别为(100±0.000)%、(40.83±0.52)%、(67.28±0.81)%、(73.19±0.73)%(P<0.01),有显著统计学意义。与空白组相比较,高糖模型组细胞活力显著降低(P<0.01);与高糖模型组相比较,HIF抑制剂组与丹黄明目汤组细胞活力均有改善(P<0.01)。4.运用流式细胞仪检测细胞凋亡率:与空白组比较,高糖模型组的早期细胞凋亡率、晚期细胞凋亡率以及总凋亡率均显著升高(P<0.01);与高糖模型组比较,HIF抑制剂组与丹黄明目汤组的早期、晚期以及总凋亡率均显著降低(P<0.01);与HIF抑制剂组比较,丹黄明目汤组的早期、晚期以及总更多凋亡率均降低更明显(P<0.01)。5.运selleck激酶抑制剂用流式细胞仪检测荧光强度:与空白组相较,高糖模型组细胞内的ROS荧光强度显著升高(P<0.01);与高糖模型组比较,HIF抑制剂组和丹黄明目汤组细胞内ROS荧光强度显著降低(P<0.01);与HIF抑制剂组比较,丹黄明目汤组细胞内ROS荧光强度降低更显著(P<0.01)。6.ELISA检测PHD3、PKM2以及乳酸浓度:与空白组相比,高糖模型组细胞内PKM2、乳酸浓度显著升高(P<0.01),PHD3浓度显著降低(P<0.01);与高糖模型组比较,HIF抑制剂组和丹黄明目汤组的细胞内PKM2、乳酸浓度显著降低(P<0.01),PHD3浓度显著升高(P<0.01);与HIF抑制剂组比较,丹黄明目汤组细胞内PKM2、乳酸浓度偏高(P<0.01),而PHD3浓度偏低(P<0.01)。7.PCR检测ERK2、Raf1、HIF2α、NDRG3基因表达水平:高糖模型组与空白组相较,ERK2、Raf1、HIF2α、NDRG3基因表达量均显著增高,具有显著统计学意义(P<0.01);HIF抑制剂组和丹黄明目汤组的基因表达量均显著低于高糖模型组(P<0.01);HIF抑制剂组与丹黄明目汤组相较,丹黄明目汤组ERK2、HIF2α基因表达量略高于HIF抑制剂组,具有统计学意义(P<0.01),而丹黄明目汤组的Raf1、NDRG3基因表达量略低于HIF抑制剂组(P<0.01)。8.WB检测ERK2、Raf1、HIF2α、NDRG3蛋白表达水平:高糖模型组与空白组相较,ERK2、Raf1、HIF2α、NDRG3蛋白表达均显著增高,具有显著统计学意义(P<0.01),HIF抑制剂组和丹黄明目汤组ERK2、Raf1、HIF2α、NDRG3蛋白表达量均显著低于高糖模型组(P<0.01);HIF抑制剂组与丹黄明目汤组相较,丹黄明目汤组ERK2、HIF2α蛋白表达量略高于HIF抑制剂组,具有统计学意义(P<0.01),而丹黄明目汤组的Raf1、NDRG3蛋白表达量低于HIF抑制剂组(P<0.01)。结论:1.在高糖环境下,丹黄明目汤能抑制RPE细胞内ROS的表达,抑制细胞的活性氧水平。2.丹黄明目汤对RPE细胞具有抗氧化损伤保护作用。3.丹黄明目汤含药血清通过改善缺氧状态,抑制了缺氧因子及炎症因子的分泌和堆积。