PLCE1/ENO1调控小鼠食管成瘤组织中糖酵解及抑制CD4~+/CD8~+T细胞免疫功能的初步研究

目的:探究4NQO药物诱导成瘤和ENO1抑制药物处理的PLCE1不同基因型C57BL/6小鼠癌组织中的糖酵解水平和CD4~+/CD8~+T细胞免疫功能。方法:(1)利用4NQO药物诱导PLCE1不同基因型的C57BL/6小鼠构建食管癌模型并且腹腔注射ENO1抑制剂;(2)利用葡萄糖、乳酸、丙酮酸及ATP检测试剂盒检测食管癌组织中的糖酵解产物水平和糖酵解关键酶己糖激酶、磷酸果糖激酶及丙酮酸激酶的m RNA水平;(3)生物信息学预测糖酵解相关酶ENO1表达水平与CD4~+/CD8~+T细胞的相关性;(4)流式细胞实验检测基因鼠食管癌组织中CD45~+T细胞、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞的比例;(5)q PCR实验检测组织中细胞因子IFN-γ、TNF-α、Granzyme B、PD-1的m RNA水平;(6)流式细胞实验检测CD8~+T细胞的IFN-γ、TNF-α、Granzyme B及PD-1表达水平;(7)流式细胞实验检测CD4~+T细胞的IFN-γ、TNF-α及PD-1表达水平。结果:(1)野生型对照组基因鼠相比于野生型处理组、纯合子对照组和纯合子处理组,食管癌组织中的葡萄糖水平降低(2.128±0.158vs 2.653±0.162vs2.529±0.286vs2.972±0.270,P<0.001),乳酸水平升高(3.260±0.598vs2.103±0.753vs2.080±0.252vs1.555±0.718,P<0.001),ATP水平升高(217.164±60.561vs105.887±83.626vs100.505±52.988,P=0.016),丙酮酸水平升高(0.048±0.001vs0.026±0.006vs0.024±0.006vs0.012±0.003,P=0.005),同样己糖激酶的m RNA水平升高(1.677±0.097vs1.203±0.166vs1.001±0.060vs0.419±0.050,P<0.001),丙酮酸激酶的m RNA水平升高,但丙酮酸激酶的m RNA水平只在野生型对照组与纯合子处理组之间有统计学意义(0.556±0.031vs0.503±0.035vs 0.558±0.034vs0.45DS-3201研究购买7±0.026,P=0.0002),磷酸果糖激酶的m RNA水平组间无统计学意义(0.734±0.063vs 0.465±0.192vs0.674±0.254vs0.463±0.054,P=0.0351);(2)食管鳞癌中ENO1的表达水平高时CD4~+/CD8~+T细胞的浸润水平下降(P<0.05);(3)在野生型对照组中肿瘤组织中的CD45~+T细胞(13.867±1.703vs18.277±4.681vs17.505±3.392vs23.823±2.921,P<0.01)、CD3~+T细胞(13.867±1.703 vs18.277±4.681vs17.505±3.392vs23.823±2.921,P<0.001)、CD4~+T细胞(13.867±1.703vs18.277±4.681vs17.505±3.392vs23.823±2.921,P<0.001)和CD8~+T细胞(13.867±1.703vs18.277±4.681vs17.505±3.392vs23.823±2.921,P<0.001)的比例较野生型处理组、纯合子对照组中和纯合子抑制剂组显著降低;(4)在野生型对照组中肿瘤组织中的FN-γ的m RNA水平较野生型处理组、纯合子对照组中和纯合子抑制剂组显著降低(5.836±0.382vs8.717±0.824vs7.770±0.438,P<0.001),相反PD-1的表达水平则升高(0.480±0.019vs0.389±0.065vs0.370±0.052vs0.267±0.051,P<0.001),在野生型对照组中肿瘤组织中的TNF-α(1.608±0.162vs2.135±0.645vs2.310±0.414vs2.529±0.106,P=0.013)和Granzyme B(18.79±2.255vs 19.85±1.864vs18.92±2.014vs22.27±1.037,P=0.031)的m RNA水平与纯合子处理组相比较低,且有统计学意义,而与野生型处理组和纯合子对照组相比无统计学意义;(5)在纯合子抑制剂组中肿瘤组织中CD8~+T细胞的FN-γ(4.48±0.622vs7.74±2.482vs10.007±2.541vs18.897±6.052,P<0.001)、TNF-α(0.657±0.048vs1.007±0.116vs0.953±0.311vs1.535±0.167,P<0.001)、Granzyme B(13.867±1.703vs18.277±4.681vs17.505±3.392vs23.823Y-27632供应商±2.921,P<0.001)的表达水平较野生型处理组、纯合子对照组中和纯合子抑制剂组显著升高,相反PD-1(1.36±0.167vs 0.933±0.156vs0.808±0.134vs0.545±0.077,P<0.001)的表达水平降低;(6)在纯合子抑制剂组中肿瘤组织中CD4~+T细胞的FN-γ(8.623±3.388vs12.633±2.186vs16.683±3.473vs23.433±4.244,P<0.001)和TNF-α(0.653±0.040vs0.787±0.080vs0.918±0.063vs1.29±0.289,P<0.001)表达水平较野生型处理组、纯合子对照组中和纯合子抑制剂组显著升高,相反PD-1(9.073±1.59vs5.887±1.153vs5.797±1.456vs3.79±0.682,P<0.001)的表达水平升高。结论:食管鳞癌中PLCEbiopsy site identification1通过ENO1促进糖酵解进而抑制CD4~+/CD8~+T细胞的免疫功能。