背景子痫前期(Pre-eclampsia,PE)是妊娠期特异性疾病,主要表现为妊娠20周后新发高血压和蛋白尿,严重时可出现多器官功能障碍。多项研究表明PE由多因素、多机制和多通路共同参与致病,其中氧化应激和铁死亡是PE发病机制中的重要环节D-Lin-MC3-DMA纯度。目前我国PE发病率约为5.6-9.4%,并且呈逐年上升趋势,亟需探索治疗PE新手段。葛selleckchem Alpelisib根素(Puerarin)是中药葛根的主要活性成分,属于异黄酮类化合物,具有抗氧化作用,临床上用于治疗心绞痛和心肌梗死。既往研究表明,灌胃葛根素后高血压大鼠模型的收缩压和舒张压显著降低。团队前期研究证实,灌胃葛根水煎液可有效预防小鼠PE发生发展。目前,有少量研究报道过葛根素可缓解PE样症状,但仍缺乏系统性论述和充分的研究依据。因此,结合既往报道,本研究在动物和细胞两个层面探究葛根素单体能否抑制PE发病,并探索相关分子机制。目的本研究拟探索葛根素通过调控滋养细胞氧化应激介导胎盘功能改变,影响PE发病的分子机制。研究方法1.将动物分成三组:control组、L-NAME组和L-NAME+puerarin组。皮下注射L-NAME诱导PE小鼠模型。葛根素处理后,观察小鼠收缩压、尿蛋白水平、仔鼠体重和胎盘病理变化;检测胎盘中HO-1、GPX4和SLC7A11蛋白表达及血清GSH含量变化。2.缺氧/复氧(H/R)和CoCl2分别诱导滋养细胞氧化应激模型。葛根素处理后,经流式细胞术、免疫荧光实验检测上述各组细胞ROS含量;同时,Erastin诱导滋养细胞铁死亡模型,通过检测HO-1、GPX4、SLC7A11、GSH和MDA变化,探究葛根素对滋养细胞氧化应激和铁死亡的影响。在滋养细胞中用siRNA敲低Hlung pathologyO-1,western blot检测HO-1、GPX4和SLC7A11表达水平。3.基于JASPAR数据库,筛选HO-1的潜在转录调控因子。并通过构建候选转录因子敲低及过表达滋养细胞株、RT-qPCR、western blot以及双荧光素酶报告基因实验,探索葛根素作用于转录调控因子参与PE发病的分子机制。结果1.与control组小鼠相比,L-NAME组小鼠胎盘HO-1表达增加,GPX4、SLC7A11表达下降,血清GSH含量降低。与L-NAME组小鼠相比,补充葛根素可显著降低孕鼠收缩压和尿蛋白、减少流产率、增加仔鼠体重、恢复胎盘正常组织结构,并下调HO-1表达,上调GPX4、SLC7A11表达,血清GSH含量显著升高。2.与滋养细胞氧化应激模型相比,葛根素处理后,细胞内ROS含量显著下降,HO-1表达显著降低,GPX4、SLC7A11和GSH显著升高,MDA含量显著下降;与对照组细胞相比,敲低HO-1后,滋养细胞GPX4和SLC7A11表达显著增加。3.与敲低对照组相比,敲低CREB后,HO-1表达显著下降,GPX4表达显著增加;与过表达对照组相比,过表达CREB后,HO-1表达显著升高,GPX4表达显著下降。双荧光素酶报告基因实验表明CREB与HO-1之间有直接结合位点。与L-NAME组小鼠相比,L-NAME+puerarin组小鼠胎盘CREB表达量显著降低。结论葛根素通过下调CREB/HO-1信号通路,抑制氧化应激诱导的滋养细胞铁死亡,影响PE的发生发展。