肿瘤耐药是导致化疗失败的主要原因,而基因突变或功能缺失是引起耐药的关键因素。前期研究显示,SPLIT多毛增强子1 (hairy and enhancer of SPLIT1, HES1)在赫赛汀耐药胃癌细胞中表达上调,抑制其活性可逆转其耐药,其机制尚未明确。本研究以赫赛汀耐药胃癌细胞NCI N87R为对象,基于CRISPR/Cas9构建HES1敲除细胞(△HES1/NCI N87R),探究HES1在胃癌赫赛汀耐药中的潜在作用。采用定量蛋白质组学分析△HES1/NCI N87R细胞蛋白质表达谱;基于基因集富集分析(GeneSet Enrichment Analysis, GSEA)和Metascape数据库进行基因本体分析;利用GeneAnalytics进行通路富集分析,并通过免疫印迹和抑制剂对筛选分子及通路研究。结果显示,相比NCI N87R细胞,△HES1/NCI N87R对赫赛汀的抗药性降低;敲除HES1使NCI N87R细胞1 263种基因表达改变,其中上调761种,下调502种,且铁死亡、脂肪酸β-氧化、自噬、谷胱甘肽代谢等多条通路显著变化。功能研究显示,△HES1/NCI N87R细胞铁离子和丙二醛浓度增加,而谷胱甘肽降低,进一步发现,铁死亡点击此处抑制剂Fer-1能够逆转△HES1/NCI N87R中pTP53、溶质载体家族7成员11 (solute carrier family 7 member 11, SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)的表达,且降低对赫赛汀的敏感性,提示HES1通过TP53/SLC7A11/GPX4通路参与调控NCI N87R细胞对赫赛汀耐药,靶向HES1介导的TP53/SLC7A1plant microbiome1/GPX4信号轴可能Etoposide体内是逆转胃癌赫赛汀耐药的潜在策略。