研究背景与目的:过量饮酒常常诱发多个器官发生病变,如胃溃疡、肝硬化,还包括神经损伤、心血管疾病,甚至癌症等等,目前临床上尚无针对急性或慢性酒精中毒的特效治疗药物。据报道杨梅素(Myricetin,MYR)具有广泛的药理作用,如抗血小板活化、抗氧化、抗肿瘤、抗光老化、抗炎、保肝护肝等,但一直以来很少有人了解其解酒作用,由于其与二氢杨梅素结构相似,本课题组根据预实验发现MYR在解酒以及保护酒精性组织损伤方面具有巨大的潜力。然而,由于其稳定性差、水溶性差、肠道吸收差和口服生物利用度差,导致MYR治疗各类疾病及酒精中毒的效果被大大限制。本研究的目的是使用Kolliphor?HS15(HS15)作为表面活性剂制备一种新型超分子聚集体(MYR-SA),通过改善MYR水溶性和稳定性而显著增加其口服生物利用度,从而提高其治疗酒精中毒的效果,为将来MYR新剂型的进一步开发提供参考,也为酒精中毒的治疗提供新的思路和选择。方法:1.MYR-SA的制备及表征建立高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定MYR体内外样品含量的方法,采用薄膜水化法制备载有MYR的Kolliphor?HS15超分子聚集体,通过激光粒度仪、透射电镜和差示扫描量热分析仪对MYR-SA的粒径、形貌等进行表征,确保本研究成功制得MYR-SA。通过测定溶解度、包封率、体外释放速率以及考察不同p H缓冲液、人工胃肠液、肝匀浆液中的稳定性等,验证MYR-SA提高MYR原料药的水溶性、稳定性和体外释放性能的能力。2.MYR-SA的肠通透性考察建立HPLC测定灌肠液中MYR含量的方法,采用大鼠在体肠单向灌流模型,考察MYR、MYR-SA、MYR+HS15、MYR+VER(维拉帕米)在大鼠空肠段的吸收情况,验证MYR-SA提高MYR肠道通透性的能力。3.MYR-SA大鼠体内药动学研究建立液质联用测定AY-22989 IC50大鼠体内血浆中MYR含量的方法,并进行方法学验证。灌胃给药MYR混悬液和MYR-SA后,测定不同时间点大鼠血浆中的药物浓度,绘制药时曲线,通过DAS 3.0软件非房室模型计算药动学参数,评价MYR-SA的药动学特征,验证其提高生物利用度的能力。4.MYR-SA治疗酒精中毒的药效研究(1)通过检测不同给药组SD大鼠在灌胃50%乙醇溶液(0.14 m L/10 g)后的血液酒精浓度,评价MYR-SA降低血液酒精浓度的能力。采用昆明小鼠灌胃62%乙醇溶液(0.16 m L/10 g)建立小鼠醉酒模型,通过观察记录不同给药组的醉酒小鼠状态、入醉时间和醉酒状态持续时间,并检测不同组小鼠肝脏中乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)、乙醛脱氢酶PUN30119分子量(Aldehyde Dehydrogenase,ALDH)的酶活力情况,从而判断MYR-SA是否通过增强ADH、ALDH酶活力从而发挥解酒的作用。(2)为评价MYR-SA对小鼠急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用,通过昆明小鼠灌胃无水乙醇(0.10 m L/10 g)建立急性酒精性胃黏膜损伤模型,观察比对并记录不同给药组小鼠胃黏膜的形态、损伤程度和胃组织病理切片;检测不同给药组小鼠胃组织中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性和丙二醛(Malonaldehyde,MDA)水平的变化,以此判断MYR-SA是否通过增强抗氧化能力来保护胃黏膜免受酒精损伤。结果:1.本实验室制得的MYR-SA呈类球形,平均粒径为11.75±0.18 nm,PDI为0.059±0.020;差示扫描量热分析显示MYR在300～400℃的两个吸热峰被掩盖;MYR-SA可以显著提高MYR原料药的水溶性、释放速率以及在人工胃肠液和肝匀浆液中的稳定性。2.大鼠空肠单向灌流试验结果显示,MYR-SA的肠道吸收速率常数和有效渗透系数分别为MYR混悬液的10.05和11.05倍,表明MYR-SA可以显著增强MYR的肠道通透性。3.药动学试验结果显示,MYR-SA在血液中的C_(max)(195.07 ng/m L)是MYR混悬液(17.19 ng/m L)的11.35倍,AUC_((0~24 h))值(333.56 ng/m L*h)是MYR混悬液(154.05 ng/m L*h)的2.17倍,表明MYR-SA具有更高的生物利用度。4.在MYR解酒功效试验中,MYR-SA能够显著延长饮酒小鼠的入醉时间,缩短小鼠醉酒状态的持续时间,并且能够明显降低饮酒大鼠的血液酒精水平,显著地提高肝脏ADH、ALDH的酶活力,从而增强解酒的能力。5.在MYR对急性酒精性胃损伤保护的试验中,与模型组和MYR混悬液组相比,MYR-SA通过显著提East Mediterranean Region高胃组织SOD活性、降低胃组织MDA水平从而显著减轻饮酒小鼠胃黏膜的病理损伤(P<0.01)。结论:本实验室制备的MYR-SA极大地提高了MYR原料药的水溶性、溶出释放速率和在人工胃肠液以及肝匀浆液中的稳定性。同时,MYR-SA拥有极小的粒径并且能有效抑制肠道P糖蛋白而促进MYR在肠道的吸收。最终,MYR-SA使MYR的口服生物利用度提高了2.17倍,显著地提高了MYR解酒和保护胃黏膜组织免受酒精损伤的功效。因此,MYR-SA将为开发易吸收的口服MYR制剂提供实验依据,为酒精中毒治疗等临床应用提供新的思路和选择。