稻瘟病菌是引起稻瘟病这一全球性水稻病害的始作俑者,我国也是稻瘟病的多发区。稻Taurine价格瘟病严重威胁着我国水稻的产量和品质,影响着我国的粮食安全。稻瘟病菌属于丝状真菌,因具有典型的侵染循环过程和致病机制而被作为研究丝状真菌致病机理的模式生物。20世纪50年代研究人员首次在神经系统中观测到含多个内腔囊泡(intralumenal vesicles,ILVs)的晚期内吞体,称为多囊泡体(multivesicular body,MVB)。21世纪初,内体分拣转运复合体(endosomal sorting complexes required for transpobiohybrid systemrt,ESCRT)被鉴定出来,开启了分子水平上对MVB的探索。MVB形成后可以与溶酶体融合降解ILVs中的货物,这一过程是多种膜结合受体的下调途径,因此ESCRT在维持细胞内蛋白质水平、信号转导、新陈代谢和生长发育等方面均发挥着极其重要的作用。ESCRT由ESCRT-0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ四个亚复合体及关键组分及调节因子Vps4、Vta1等组成。本文主要对ESCRT-0(Mo Hse1和Mo Vps27)和ESCRT-Ⅲ的辅助因子Mo Ist1进行了系统性分析,阐明了其在稻瘟病菌致病过程中的调控机制。Mo Hse1、Mo Vps27和Mo Ist1的缺失导致稻瘟病菌生长减慢,产孢严重受损,致病力显著下降。高压冷冻电镜观察发现,ΔMohse1、ΔMovps27和ΔMoist1基本无法形成MVB,无法产生ILVs,导致以酪氨酸激酶受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为代表的众多蛋白质降解受阻。EGFR过度积累引起下游的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)过度激活,WesNVP-TNKS656试剂tern blot检测发现Pmk1、Mps1、Osm1磷酸化水平上调明显。透射电镜观察发现,ΔMohse1、ΔMovps27和ΔMoist1液泡呈现碎片化。酵母双杂交和Pull-down试验分析发现,Mo Vps27和自噬体形成相关蛋白Mo Atg5、自噬体与液泡融合相关蛋白Mo Vps18存在相互作用。同时Western blot检测表明,ΔMohse1、ΔMovps27和ΔMoist1自噬体过度积累,自噬异常。此外,平板胁迫试验发现ΔMohse1、ΔMovps27和ΔMoist1对内质网应激诱导剂二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)敏感。Western blot检测发现,ΔMohse1、ΔMovps27和ΔMoist1中内质网自噬标记蛋白GFP-Mo Sec62降解减慢。酵母双杂交和Pull-down试验发现,ESCRT-0与COPII存在互作(COPII的亚基Lst1被证明与内质网自噬受体Atg40共同靶向作用于内质网降解),说明Mo Hse1、Mo Vps27和Mo Ist1的缺失影响了内质网自噬。综上,本研究表明ESCRT参与了MVB生成、MAPK途径、巨自噬、内质网自噬等众多过程,对稻瘟病菌的致病力至关重要,为揭示稻瘟病菌致病机理和细胞自噬分子机制提供了新的见解。