姜黄素类似物是一类以天然多酚类物质的姜黄素为基础而合成的化学小分子,因其具有抗炎、抗肿瘤以及抗病毒等功效而广泛受到关注。5-双(2-氟苯基)亚甲基-4-哌啶酮(分子式:C_(19)H_(15)F_2NO;分子量:311;缩写为EF-24)是一https://www.selleck.cn/products/XL184.html种姜黄素类似物,已鉴定发现其具有多样化的药理功能。在此基础上,本课题继续研究EF-24抗乳腺癌细胞增殖作用以及抗鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)的复制。乳腺癌已成为全球女性肿瘤死亡的主要因素,目前已超肺癌成为世界第一大癌症,其治疗手段多样但效果不佳,开发更多具有肿瘤细胞抑KD025制效应和影响肿瘤发生的化合物成为关注热点。因此,本研究首先通过MTT、细胞划痕以及transwell实验发现EF-24(5μM)对两株乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)均具有抗增殖和抗迁移活性。进一步通过吖啶橙染色检测到自噬小泡,透射电镜观察到自噬小体的双膜或多膜结构。同时,利用Western blot检测到自噬关键蛋白LC3和p62的上调表达。免疫荧光实验还发现EF-24能通过阻断自噬体与溶酶体的融合来抑制MCF-7细胞中自噬小体的降解。相反在MDA-MB-231细胞中,EF-24可以诱导自噬的启动,而不是阻止自噬小体的降解。为深入研究EF-24抗乳腺癌细胞增殖的分子机制,通过Hoechst染色、流式细胞术和Western blot实验发现,EF-24(5μM)诱导了MCF-7和MDA-MB-231细胞的凋亡。自噬抑制剂3-MA能进一步增强EF-24诱HIV unexposed infected导的MCF-7细胞凋亡,而在MDA-MB-231细胞中,3-MA却缓解了EF-24诱导的细胞凋亡。此外,EF-24处理上调了MDA-MB-231细胞中Caspase-3和Caspase-9的酶活性,并诱导ROS积累,下调线粒体膜电位。这些结果证实EF-24激活了MDA-MB-231细胞线粒体凋亡途径。此外,进一步研究了EF-24抗病毒效应,本文以SCRV为研究对象,首先通过CPE观察、病毒滴度测定、RT-q PCR和Western blot实验发现EF-24与SCRV共孵育对子代病毒的抑制效果最佳。此外,流式细胞术实验发现EF-24能有效减少SCRV诱导的EPC细胞凋亡信号。进一步酶活检测发现,EF-24处理能够下调SCRV感染激起的Caspase-3和Caspase-9酶活性,初步证实EF-24通过影响线粒体凋亡途径达到抗SCRV的作用。综上,当前的研究证实了EF-24(5μM)具有抗乳腺癌细胞增殖和抗SCRV病毒复制的作用。为该化合物潜在的体内抗癌活性和抗病毒药物的开发提供了坚实的基础。