目的:马齿苋(Portulaca oleracea L.,POL),是国内分布广泛的一种药食同源性中草药,具有清热解毒、调节免疫等作用。近年来,本课题组从马齿苋中提取、分离和纯化得到马齿苋多糖(POL-Polysaccharide,POL-P)。前期研究表明,POL-P能提高机体免疫力,降低体内毒素,同时也发现,POL-P的免疫增强作用存在生物利用度低,且结合新型给药系统的研究相对薄弱等问题,致使POL-P的应用受到FUT-175体内实验剂量局限。脂质体是由磷脂双分子层包裹形成的水相核心微囊泡,作为一种优良的药物载体,具有提高生物利用度并降低毒副作用等特性。本研究综合考虑POL-P具有免疫增强的作用以及脂质体作为药物载体的良好特性,建立马齿苋多糖脂质体(POL-P Li确认细节posome,POL-PL)的最佳制备工艺并对其免疫增强活性进行初步评价,通过二者的共同作用,解决POL-P的应用局限且进一步提高其免疫增强活性。方法:首先,采用单因素实验-响应面优化的方法得到POL-PL的最佳制备工艺。利用逆相蒸发-微孔滤膜挤压法制备POL-PL,在六因素五水平的单因素实验基础上,选择影响包封率最大的三个单因素条件,即旋蒸温度、载药比、膜材比3个因素进行响应面优化,其他因素选用最优条件。利用响应面法进行工艺优化后得到最佳制备工艺条件,可行性调整后进行验证,最终得到最佳的POL-PL制备工艺。其次,对最优工艺制备的POL-PL进行形态学及理化性质分析。通过形态学、透射电镜观察,粒径分布、多分散系数(Polydispersity,PDI)及电势的测定,红外吸收光谱分析以及缓释性、储存稳定性实验等方法,明确POL-PL的形态及理化性质。再次,初步评价POL-PL对小鼠脾淋巴细胞的免疫增强活性。利用CCK-8法探究POL-P、空白脂质体、POL-PL对小鼠脾淋巴细胞的最大安全浓度,并选择最适浓度检测POL-PL对小鼠脾淋巴B、T细胞增殖、B淋巴细胞IgG分泌及T淋巴细胞亚群分化的影响,确定POL-PL对小鼠脾淋巴细胞免疫增强活性的初步评价。最后,初步评价POL-PL对小鼠巨噬细胞Raw264.7的免疫增强活性。利用CCK-8法确定POL-PL对小鼠巨噬细胞Raw264.7的最大安全浓度,并选择最适浓度检测POL-PL对Raw264.7细胞增殖、吞噬活性、细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)水平影响,确定POL-PL对小鼠脾淋巴细胞免疫增强活性的初步评价。结果:1、POL-PL最佳制备工艺条件为:磷脂浓度为5 mg·m L~(-1);超声时间为5 min;卵磷脂与吐温80质量比为15:1;膜材比为5:1;旋蒸温度40℃;脂药比为27:1。验证实验测定其包封率为37.83±1.49%,符合模型预测。2、POL-PL外观透明清亮并呈淡蓝色乳光,透射电镜下呈球形或椭圆形的囊泡,平均粒径和PDI分别为100.037±1.990 nm、0.232±0.003(n=3),Zeta电位为(-23.033±1.686)m V(n=3)。红外结果表明,POL-PL形成过程中没有形成新的化学键,是通过静电力作用结合形成;POL-PL的缓释性良好,4℃储存一个月包封率下降5%。3、POL-PL对小鼠淋巴细胞最大安全浓度为62.5μg·m L~(-1),最佳培养时间为24 h。与POL-P、BL、BC组相比,POL-PL可显著促进小鼠脾淋巴B、T细胞增殖(P<0.05),最佳剂量为16μg·m L~(-1)。POL-PL对小鼠脾淋巴B细胞IgG分泌量显著增加(P<0.05);流式细胞术测定POL-PL对小鼠脾淋巴T细胞亚群CD4~+/CD8~+的比值最显著(P<0.05)。4、POL-PL对小鼠巨噬细胞Raw264.7的最大安全浓度为62.5μg·m L~(-1),最佳培养时间为24 h。与POL-P、BL、BC组相比,POL-Pthree dimensional bioprintingL可以显著促进Raw264.7细胞增殖和吞噬活性(P<0.05),最佳剂量为16μg·m L~(-1)。POL-PL可显著上调Raw264.7细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6及NO水平(P<0.05)。结论:综上所述,本研究采用逆相蒸发-微孔滤膜挤压法制备POL-PL,单因素-响应面法优化其最佳制备工艺。按照最佳制备工艺制备POL-PL进行形态学及理化性质分析并进一步进行体外实验,明确了POL-P经过脂质体包被后增加了缓释性,并验证了其对小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞Raw264.7的免疫增强活性。该实验结果为提高中药活性成分的研究提供思路,且为研发多糖类免疫增强剂提供理论依据。