第一部分 PD-1抑制剂相关性心肌炎模型建立目的:建立PD-1抑制剂相关性心肌炎模型。方法:方案一:将10只C57BL/6小鼠每只皮下接种0.1ml Lewis肺癌细胞,种瘤后查看、记录小鼠植瘤状况,第8天得到标准的小鼠肿瘤模型,将其随机分为2组,每组5只:空白对照组(种瘤后第10,13,16天bio-responsive fluorescence,腹腔注射0.9%Nacl注射液0.2ml/只);免疫治疗组(种瘤后第10,13,16天,腹腔注射RMP1-14:0.2mg/只)。方案二:将12只雄性6-8周的BALB/c小鼠(体重为18-20g)随机为4组,每组3只:A:正常+IgG组(n=3)、B:正常+RMP1-14组(n=3)、C:EAM+IgG组(n=3)、D:EAM+RMP1-14组(n=3)。正常+IgG组第0、7天皮下注射0.1 mL生理盐水,第14、16、18、20天腹腔注射IgG;正常+RMP1-14组第0、7天皮下注射0.1 mL生理盐水,第14、16、18、20天腹腔注射RMP1-14 0.2 mg;EAM+IgG组第0、7天皮下注射0.1 mL My HC-α,第14、16、18、20天腹腔注射IgG;EAM+RMP1-14组第0、7天皮下注射0.1 mL My HC-α,第14、16、18、20天腹腔注射RMP1-140.2 mg。实验第21天处理小鼠,收集小鼠粪便、血液、心脏,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清肌钙蛋白(c Tn-1)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)心脏标志物水平,使用心脏组织苏木精-伊红(HE)染色进行心肌炎症程度评分。结果:方案一结果:实验组与对照组小鼠血清cTn-1、CK-MB浓度差异不显著。实验组、对照组均未见心肌纤维变性坏死、炎性细胞浸润、纤维组织增生,无法进行炎症程度分级Ceralasertib体内方案二结果:1.心脏标志物水平:实验第21天,EAM+RMP1-14组小鼠血清中CK-MB浓度高于正常+RMP1-14组(10.976±0.393 VS 6.292±0.614,P<0.01),EAM+IgG组小鼠血清中CK-MB浓度高于正+IgG组(8.011±0.875 VS 7.086±0.438,P>0.05),EAM+RMP1-14组小鼠血清中CK-MB浓度高于EAM+IgG组(10.976±0.393 VS8.011±0.875,,P<0.01);EAM+RMP1-14组小鼠血清中c Tn-1浓度明显高于正常+RMP1-14组(75.238±5.938 VS 50.320±3.111,P<0.01),EAM+IgG组小鼠血清中c Tn-1浓度高于正+IgG组(62.979±8.766 VS 51.832±3.004,P<0.05),EAM+RMP1-14组小鼠血清中CK-MB浓度高于EAM+IgG组(75.238±5.938 VS 62.979±8.766,P<0.05)。2.AM-2282体外心脏HE染色:EAM+IgG组较少心肌纤维变性坏死、炎性细胞浸润、纤维组织增生,分级轻微(+)为主,存在少量轻度(++),EAM+RMP1-14组较多心肌纤维变性坏死、炎性细胞浸润、纤维组织增生,分级增高,存在较多轻度(++)、少量中度(+++)。结论:1.直接利用RMP1-14诱导心肌炎未成功。2.My HC-α可以成功建立实验性自身免疫性心肌炎模型,RMP1-14的应用促进了心肌炎的发生发展。第二部分 PD-1抑制剂对自身免疫性心肌炎小鼠肠道菌群的影响目的:检测小鼠肠道菌群的结构组成和功能变化。方法:提取粪便DNA后进行肠道微生物16Sr RNA测序,通过Alpha多样性、Beta多样性、物种差异分析、KEGG通路分析综合评价肠道微生物组成结构及功能的改变。结果:肠道菌群alpha多样性示各组未见明显差异,Beta多样性示各组差异显著,物种差异分析示各组在门和属水平上微生物组成存在差异,功能分析显示D组HCM代谢通路比C组表达上调。结论:RMP1-14可以改变小鼠肠道菌群的结构组成和功能。