慢病毒载体能将外源基因稳定整合至多种细胞的基因组，在基因治疗领域中具有广泛应用。固定床反应器可规模化培养贴壁细胞并通过质粒瞬时auto-immune response转染的方式生产慢病毒，但其慢病毒产量受到各种操作参数的影响。本研究对慢病毒生产过程中质粒转染条件和细胞培养参数进行优化，并在国产固定床反应器中验证了优寻找更多化后的工艺。结果表明，在质粒转染过程中，当PEI与DNA混合时质量比在2:1及以上、转染时的DNA浓度等于或高于2μg/mL、转染6 h及以上时可显著提高质粒转染效率；而混合时的DNA浓度和混合时间对转染效率的影响较小，其主要影响外源基因在细胞中的表达。在HEK293T细胞培养中，在5.0×10~4 cells/cm~2的高接种密度下细胞在固定床载体表面均匀分布并较快进入指数生长期；而转染时过高或过低的细胞密度均不利于慢病毒生产，当细胞密度为1.0×10~6 cells/cm~2时，可获得较高的慢病毒滴度。采用上述优化的工艺条件，在面积为2.0 m~2的国产固定床反应器中收获的慢病毒产量达2.4×10~(10) TU。本研究结果为建立selleck抑制剂基于固定床反应器的慢病毒载体高效生产工艺提供数据支撑。