大黄调控脓毒症心肌损伤的机制研究

研究目的:基于网络药理学探讨大黄调控脓毒症心肌损伤的机制研究。研究方法:1.首先通过TCMSP数据库,以“大黄”为关键词,获得大黄相对应的靶点蛋白进行归纳整合;分别从Gene Cards、OMIM和pharm GKB数据库收集脓毒症心肌损伤疾病相关靶点,然后在STRING数据库构建蛋白相互作用网络,antibiotic pharmacist之后使用DAVID数据库进行GO功能富集分析及KEGG通路功能富集分析,构建化合物-靶点-通路-疾病网络图,预测大黄治疗脓毒症心肌损伤的作用机制。2.利用大鼠心肌细胞H9C2为研究对象,在培养液里加入LPS孵育构建心肌损伤模型,分组如下:Control组;LPS组(10μg/ml);LPS+Emodin组(5、10、15μmol/l)组。CCK8检测细胞增殖、流式细胞术分析细胞凋亡、Mitosox测定线粒体ROS含量、JC-10法检测线粒体膜电位水平、荧光探针Calcein AM检测线粒体通透性转换孔开放程度、细胞电镜分析线粒体超微结构、Western Blot检测相关信号通路蛋白表达水平。研究结果:1.网络药理学分析显示:大黄治疗脓毒症心肌病的潜在作用靶点共21个,主要涉及CASP3、BAX、BCL-2、TP53、ILB、MYC、TNF、PTGS2、PPARG这些靶点对调控脓毒症心肌损伤至关重要。GO功能富集分析共得到164条相关通路,KEGG富集分析共得到16条相关通路,其中PI3K/AKT、MAPK、TNF等信号通路与炎症反应及凋亡密切相关。2.在LPS诱导的CB-839抑制剂脓毒症心肌损伤细胞模型中,细胞增殖能力下降;心肌细胞凋亡增加;线粒体ROS增加;线粒体膜电位降低;线粒体通透性转换孔开放;线粒体超微结构破坏。大黄Docetaxel molecular weight在一定程度上能够抑制脓毒症引起的心肌细胞氧化应激,减轻线粒体功能障碍,发挥心肌保护作用。3.在LPS诱导的脓毒症心肌损伤细胞模型中,p-PI3K、p-AKT、Caspase-3、Bax的蛋白表达水平LPS组增加,而Bcl-2的蛋白表达水平降低。大黄可逆转上述效应,以10μmol/l效果最显著。研究结论:大黄通过PI3K/AKT通路调控心肌细胞线粒体氧化应激,减少细胞凋亡,降低脓毒症引起的心肌损伤。