目的:通过观察加速衰老小鼠P8(Senescence accelerated mouse prone 8,SAMP8)海马组织中miRNA-124以及Notch信号通路关键分子蛋白和基因的水平变化,探讨针刺调控miRNA-124靶向Notch信号通路改善老年性痴呆NSCs微环境的机制。方法:1.选取健康8个月大的雄性SAMP8和SAMR1小鼠,分别随机分为以下9组,SAMR1对照组、SAMP8模型组、NSCs移植组、NSCs假移植组、穴位组、非穴组、miR-124高表达组购买Ipatasertib、miR-124低表达组和miR对照组。2.干预方法:应用三焦针法对移植后穴位组、非穴组、miR-124高表达组、miR-124低表达组和miR对照组小鼠进行针刺干预,选穴为膻中、中脘、气海、双侧血海和足三里,非穴位组小鼠在双侧肋下选择两个非穴位点,SAMR1对照组、SAMP8模型组、NSCs移植组、NSCs假移植组进行与针刺干预相同程度的捉抓刺激。共干预治疗30天,每天1次,每7天暂停1天治疗,在第15天进行NSCs移植。3.行为学评价:采用Morris水迷宫进行隐蔽平台试验5天,探索试验1天,反向试验3天及可视平台试验1天,观察各组小鼠逃避潜伏期的变化,对比分析其学习记忆能力。4.ELISA法检测Aβ40、Aβ42、β-分泌酶、γ-分泌酶、磷酸化Tau蛋白、Tau蛋白、APP的表达水平。5.应用Western blot和实时荧光定量PCR技术检测小鼠海马组织中Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP等蛋白和基因的表达。6.通过实时荧光定量PCR法检测AD小鼠海马组织中miR-124基因的表达。结果:1.Morris水迷宫实验结果显示,隐蔽平台实验中,除SAMP8模型组和NSCs假移植组逃避潜伏期无明显改变之外,其余各组小鼠的逃避潜伏期随训练天数的增加而逐渐缩短,从第四天开始具有统计学差异(P<0.05)。组间两两比较结果显示,第1、2天各组小鼠之间的逃避潜伏期没有明显差异性(P>0.05);第3天结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组小鼠的逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.05);与SAMP8模型组相比,NSCs移植组和穴位组逃避潜伏期明显缩短,具有统计学差异(P<0.05);第4天结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组、NSCs假移植组和非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有显著性差异(P<0.01);与SAMP8模型组和NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组和miR-124高表达组逃避潜伏期均明显缩短,具有显著性差异(P<0.05);与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有显著性差异(P<0.01)。第5天结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组、NSCs假移植组和非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有显著性差异(P<0.01);与SAMP8模型组和NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组、miR-124高表达组和miR-124低表达组逃避潜伏期明显减少,具有统计学差异(P<0.05);与移植组相比,miR-124高表达组逃避潜伏期明显缩短,具有显著性差异(P<0.05);与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有统计学差异(P<0.01)。空间探索实验结果显示,与SAMR1对照组比较,SAMP8模型组在原平台象限停留时间较短且跨越平台次数较少,具有显著性差异(P<0.01);与SAMP8模型组和NSCs假移植组相比,穴位组、miR-124高表达组和miR对照组逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.05),穴位组跨越平台次数较多,具有显著性差异(P<0.01);与穴位组比较,非穴位组和miR-124低表达组小鼠在原平台象限停留时间较短,具有显著性差异(P<0.05);与miR-124高表达组相比,NSCs移植组、非穴位组和miR-124低表达组在原平台象限停留时间较短,具有显著性差异(P<0.05)。反向平台实验中,除SAMP8模型组和NSCs假移植组逃避潜伏期无明显改变之外,其余各组的逃避潜伏期随训练天数的增加有缩短趋势。两两比较结果显示:第7天,与SAMR1对照组相比,其余各小组的逃避潜伏期均有延长的趋势;第8天,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.05);与SAMP8模型组相比,NSCs移植组、穴位组和miR空载组逃避潜伏期明显缩短,具有统计学差异(P<0.05);与NSCs移植组相比,穴位组和miR-124高表达组逃避潜伏期有缩短趋势;与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期有延长趋势。第9天,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.01);与SAMP8模型组相比,穴位组逃避潜伏期明显减少,具有统计学差异(P<0.05);与NSCs移植组相比,穴位组和miR-124高表达组逃避潜伏期有缩短趋势;与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期有延长趋势。可视平台实验结果显示,各组小鼠逃避潜伏期没有显著性差异。2.应用ELISA法检测Aβ40、Aβ42、β-分泌酶、γ-分泌酶、磷酸化Tau蛋白、Tau蛋白以及APP的表达水平,结果显示,与SAMR1对照组比较,SAMP8对照组中Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶的表达水平显著升高(P<0.01),Tau蛋白水平显著降低(P<0.01);与SAMP8对照组相比,NSCs移植组与穴位组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著降低(P<0.01),Tau蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与NSCs假移植组相比,NSCs移植组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著降低(P<0.01),Tau蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与穴位组相比,非穴组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著升高(P<0.05),Tau蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与miR对照组相比,miR-124高表达组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著降低(P<0.05),Tau蛋白表达水平显著升高(P<0.01),miR-124低表达组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著升高(P<0.01),Tau蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。3.应用Western blot方法检测结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组小鼠海马组织中Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达升高,具有显著性(P<0.01);与SAMP8模型组比较,NSCs移植组、穴位组以及非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达降低,具有显著性(P<0.01);与NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组与非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达降低,具有显著性(P<0.05);与穴位组相比,NSCs移植组与非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达显著升高(P<0.05)。PCR结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组小鼠海马组织中Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平升高,具有显著性(P<0.01);与SAMP8模型组比较,NSCs移植组、穴位组、非穴位组以及miR-124高表达组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平降低,具有显著性(P<0.01);与NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组、非穴位组以及miR-124高表达组NTelaglenastat抑制剂otch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平降低,具有显著性(P<0.01);与穴位组相比,NSCs移植组与非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平升高Enfermedad de Monge,具有显著性(P<0.05)。4.PCR结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8小鼠海马组织中miR-124基因水平降低(P<0.01);与SAMP8比较,NSCs移植组、穴位组和miR-124高表达组中miR-124基因水平均升高(P<0.01);与NSCs假移植组相比,穴位组中miR-124基因水平显著升高(P<0.05);与穴位组相比,NSCs移植组中miR-124基因水平降低(P<0.05);与miR对照组相比,miR-124高表达组miR-124基因水平显著升高(P<0.01),miR-124低表达组miR-124基因水平显著降低(P<0.01)。结论:三焦针法通过调节痴呆小鼠海马微环境miR-124基因,影响其靶向基因介导的Notch信号转导通路,改变NSCs海马组织局部微环境,促进NSCs更好地发挥其生物学功能,从而促进NSCs移植后SAMP8小鼠认知功能和记忆力的改善。