食品中化学性污染主要来自农业种植的源头污染、环境污染以及滥用及违规使用添加剂带来的污染,本研究以氟虫腈(fipronil,FPN)、联苯菊酯(bifenthrin,BF)、菌核净(dimethachlon,DMT)、丙溴磷(profenofoAlpelisibs,PFF)、苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,B[a]P)、十氯酮(chlordecone,CLD)、硫丹(endosulin,EndS)、六六六(hexachlorocyclohexane,HCH)、非那西丁(phenacetin,PNCT)及乙酰氨基酚(acetaminophen,PAP)共10种典型有机污染物为研究对象,通过研制单克隆抗体,开发相应的免疫快速检测分析方法。1、以上10种有机污染物均为小分子化合物,无法引起免疫应答,根据以上10种物质分子结构特征,从物质自身、结构类似物及代谢物出发,通过化学反应进行修饰,分别获得2个以上相应的半抗原,并采用高效液相色谱串联质谱仪(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)及核磁共振氢谱(proton nuclear magnetic resonance spectroscopy,~1HNMR)进行表征。通过碳二亚胺法与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)或鸡卵白蛋白(OVA)偶联,以制备相应的抗原,并采用紫外-可见分光光度计(UV-Vis)对所制备的抗原进行鉴定。(1)从目标分子自身出发,设计合成FPN、PNCT与PAP的半抗原。通过对FPN分子中氰基的水解反应及含有羧基的半抗原;通过PAP分子中酚羟基与4-溴丁酸乙酯的取代反应及酯水解反应制备具有3C间隔臂且具有羧基的一种半抗原。(2)从目标分子的代谢物出发,设计合成B[a]P半抗原。B[a]P的代谢物7,8,9,10-四氢苯并[a]芘-7-醇与7,8,9,10-四氢苯并[a]芘-7-酮分别通过与琥珀酸酐DS-3201试剂的取代反应基与羧甲氧基胺半盐酸盐(CMO)的肟化反应,制备具有3C间隔臂且具有羧基的2种半抗原。(3)从结构类似物出发,设计合成FPN、BF、DMT、PFF、CLD、EndS、HCH、PNCT与PAP。FPN结构类似物咪唑环上的插入反应制备含羧基的另一个半抗原;BF的结构类似物2-甲基–联苯3-甲酸,2-甲基-联苯-4-乙酸,均含有羧基,且羧基所在的位置及与苯环的距离不同,作为针对BF的2种半抗原;2-甲基-联苯-3-甲醇作为BF的另一种结构类似物,通过分别于琥珀酸酐和卡龙酸酐反应制备另2种针对BF的半抗原;1-(3,5-二氯苯基)-1H-吡咯烷酮-3-甲酸与DMT结构类似且含有羧基,作为针对DMT的一种半抗原,1-(3,5-二氯苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮通过与巯基丙酸乙酯的加成反应及对酯的水解反应制备针对DMT的另一种半抗原;通过多步骤的有机合成反应制备具有5C间隔臂和羧基的PFF结构类似物作为针对PFF的一种半抗原,另外一种结构类似物4-溴-2-氯苯酚与琥珀酸酐反应获得对PFF的另种半抗原;通过对CLD的结构类似物克来范的水解获得具有5C间隔臂且含羧基的针对CLD、EndS、HCH的一种半抗原,结构类似物氯菌酸通过酰胺化反应获得具有5C间隔臂且含羧基的针对CLD、EndS、HCH的另一种半抗原;3-乙酰基对乙酰氨基酚与PAP结构相似,通过与羧甲氧基胺半盐酸盐(CMO)的肟化反应,制备具有3C间隔臂且具有羧基的针对PNCT与PAP的另一种半抗原。2、采用所制备的抗原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤细胞技术筛选分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株;FPN单克隆抗体(mAb)1B6、抗BF mAb 2D9、DMT mAb 1F4、PFF mAb 4C9;B[a]P mAb 4E8、CLD、EndS与HCH mAb 4A2;PNCT与PAP mAb 2D6。其中,PFF mAb 4C9亚型为IgG2a,其他抗体亚型均为IgG2b。抗体亲和力常数Ka值在5.3×10~8～9.6×10~9L mol~(-1)之间。3、间接竞争酶联免疫吸附检测方法(icELISA)的建立。针对FPN的IC_(50)值为0.5ng mL~(-1),与氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚的交叉反应率分别为26.5%,49.3%与20.6%;针对BF的IC_(50)值为58.7 ng mL~(-1),与其他拟除虫菊酯农药无交叉反应;针对DMT的IC_(50)值为2.8 ng mL~(-1),与其他结构类似物无显著交叉反应;针对PFF的IC_(50)值为27.6 ng mL~(-1),与其他有机磷结构类似物无交叉反应率;针对B[a]P的IC_(50)值为0.8 ng mL~(-1),与B[a]P-7-ol,芘,芘丁酸,(?),蒽,苯并[a]蒽,菲的交叉反应率分别为200.9%,24.7%,389.7%,35.36%,1.6%,12.6%与1.5%;针对CLD的IC_(50)值为1.1 ng mL~(-1),与EndS、HCH的交叉反应率分别为10.6%,3.5%;针对PNCT与PAP的IC_(50)值分别为3.5与34.8 ng mL~(-1)。4、胶体金免疫层析试纸条(GNP-ICS)快速检测方法的建立。GNP-ICS检测添加FPN的黄瓜和鸡蛋样本中检出限(vLOD value)分别为0.3,0.5 ng mL~(-1),消线值(cut-off value)均为10 ng mL~(-1);黄瓜和鸡蛋样本中氟甲腈,氟虫腈砜,氟虫腈硫醚的消线值分别为50,25与50 ng mL~(-1)。检测添加BF的黄瓜和卷心菜的样本,vLOD和消线值均分别为50与1.0×10~3 ng mL~(-1)。检测西红柿和生菜样本中DMT的vLOD和消线值均分别为5.0与40 ng mL~(-1)。检测针对添加PFF的苹果、橙子、猕猴桃样本vLOD值均为1.0×10~3 ng mL~(-1)。检测添加B[a]P的茶籽油样本的vLOD和消线值均分别为10与100 ng mL~(-1)。检测添加CLD,EndS与HCH的生菜样本的vLOD值分别为为1.0,2.5与10 ng mL~(-1)。针对PNCT与PAP的GNP-ICS检测添加PNCT的饮料样本vLOD和消线值均分别为2.5与50 ng mL~(-1);针对含PAP的药物样本的vLOD和消线值均分别为25与500 ng mL~(-1)。结果表明,基于针对FPN、BF、DMT、PFF、B[a]P、CLD、EndS、HCH、PNCT、PAP等10种有机污染物的单克隆抗体构建的icELISA均具有较高的灵敏度与特异性。同时,基于以上单克隆抗体构建的GNP-ICS在针对10种有机污染物的检测中同样展现出较高的灵敏度与Sulfonamides antibiotics特异性,并能够实现对实际样本的快速、高通量和现场检测。