目的:本研究基于网络药理学和生物信息学,运用体外细胞实验探究山奈酚、芒柄花素抗非小细胞肺癌的作用及其机制。方法:(1)通过网络药理学探究山奈酚、芒柄花素对非小细胞肺癌作用的分子机制。首先通过Swiss Target Prediction和Pharm Mapper数据库获得山奈酚、芒柄花素的作用靶点,Gene Cards数据库和TTD数据库获得非小细胞肺癌靶点,运用生信技术从GEO数据库获得非小细胞肺癌的差异基因,利用韦恩平台获取山奈酚、芒柄花素、非小细胞肺癌的交集靶点;利用Cytoscape3.9.0软件绘制PPI网络并获取核心靶点;利用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析,并用Cytoscape3.9.0软件绘制“靶点-通路”图;利用GEPIA、HPA、Kaplan-Meier Plotter数据库对核心靶点分别进行基因表达水平分析、蛋白表达水平分析和生存分析。(2)进行体外细胞实验探讨山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。以CCK-8和平板克隆形成实验探讨山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞增殖的影响,并根据CCK-8的实验结果计算半数抑制率(IC_(50))确定给药浓度;细胞粘附实验分别检测山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞粘附能力的影响;划痕实验分别检测山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞迁移的影响;Transwell实验分别检测山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞侵袭的影响;利用Hoechst33342染色法分别检测山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞凋亡的影响;q PCR检测肿瘤基因m RNA的GSK1349572溶解度表达水平;Western Blot检测肿瘤相应蛋白的表达水平。结果:(1)通过Swiss Target Prediction和Pharm Mapper数据库筛选出山奈酚和芒柄花素的靶点共有113个,通过Gene Cards、TTD数据库获取非小细胞肺癌靶点5818个,利用生信技术从GEO数据库获取差异基因3812个,其中上调基因1652个,下调基因2160个,借助韦恩平台获得交叉靶点83个;利用Cytoscape3.9.0软件的插件Cyto NCA筛选出前五位核心靶点为AKT1selleck Erastin、ESR1、SRC、EGFR、MMP9,排在首位的是AKT1;KEGG富集分析排名前五位的是内分泌耐药、氮代谢、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药、癌症通路、类固醇激素生物合成,它们均与PI3K/Akt信号通路紧密相关;在“靶点-通路”网络图中,与通路关联强度最大的靶点为PIK3R1、AKT1,与所有靶点关联强度最大的信号通路为PI3K/Akt。这些结果表明山奈酚、芒柄花素作用于非小细胞肺癌主要的信号通路可能是PI3K/Akt。(2)通过细胞实验探讨了山奈酚、芒柄花素对肺癌A549细胞的影响。CCK-8和平板克隆形成实验结果表明山奈酚、芒柄花素可以显著抑制肺癌A549细胞的增殖能力,且呈浓度依赖性和时间依赖性;细胞粘附实验结果显示山奈酚、芒柄花素可以显著抑制肺癌A549细胞的粘附能力;划痕实验结果显示山奈酚、芒柄花素可以显著抑制肺癌A549细胞的迁移;Transwell实验结果显示山奈酚、芒柄花素可以显著抑制肺癌A549细胞的侵袭;Hoechst33342染色结果显示山奈酚、芒柄花素可以促进肺癌A549细胞的凋亡;q PCR实验结果显示山奈酚、芒柄花素可以下调肺癌A549细胞中PI3K、Akt、Bcl-2的m RNA表达水平,上调Bax的m RNA表达水平;Western Blot实验结果显示山奈酚、芒柄花素可以下调肺癌A549细胞中PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2的蛋白表达水平,上调Bax的蛋白表latent TB infection达水平。结论:山奈酚、芒柄花素可以显著抑制肺癌A549细胞的增殖,迁移和侵袭,促进其凋亡,其作用机制可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活。