背景:金果榄为防己科青牛胆(Adverse event following immunizationTinospora sagittata(Oliv.)Gagnep.)或金果榄(Tinospora Capillipes Gagnep.)的干燥块根,具有清热解毒、利咽止痛之功效,多糖是金果榄重要组成成分之一。研究表明多糖在维系免疫系统稳态、炎症与自身免疫性疾病、肿瘤的异常增殖等方面均显现出重要的生物学功效,可通过提高机体免疫机能从而实现抑制肿瘤的发生发展。但目前关于金果榄多糖的研究仅仅停留在提取工艺和体外抗氧化活性等方面,未见有关其结构和抗肿瘤免疫活性相关研究报道。目的:本文利用超声辅助提取法提取金果榄粗多糖,通过Gefitinib分子量柱色谱分离、纯化得均一多糖,采用光谱及化学分析法对均一多糖进行结构表征,采用原发性肝癌小鼠模型评价均一多糖抗肿瘤免疫活性,为金果榄多糖组分的深入开发和利用提供科学依据。方法:1.本文以金果榄粉末为原料,采用超声辅助提取、水提醇沉法得到金果榄粗多糖(Tinospora sagittata polysacchride,TSP)。通过DEAE-52纤维素树脂和葡聚糖凝胶Sephdex G-100对粗多糖TSP进行纯化,得到均一中性多糖片段(TSP-W)。通过硫酸苯酚法、BCA法、HPGPC、紫外光谱分析、红外光谱分析、HPLC柱前PMP衍生化、甲基化分析以及SEM等方法对TSP-W的成分组成和结构进行分析。2.以Akt/N-Ros基因导入的新型转基因原发性肝癌小鼠为模型,用对照剂PBS和TSP-W(400 mg/kg)分别灌胃处理,研究TSP-W的抗肿瘤免疫活性。对小鼠生存期、体重、肝肿瘤大小、肝功能、肝脏组织进行观察和检测,以评价TSP-W对原发性肝癌小鼠的保护作用。采用流式细胞术分析TSP-W对小鼠脾脏T细胞、CD8+T细胞中耗竭、增殖相关分子的影响。采用流式细胞术检测TSP-W对肝癌小鼠肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞中耗竭、增殖相关分子以及杀伤性细胞因子的影响。采用ELISA法检测TSP-W对血清TNF-α、IFN-γ水平的影响。结果:1.从金果榄中分离得到均一水溶性多糖TSP-W;其总糖和蛋白质含量分别为97%和2.31%;HPGPC显示,TSP-W分子量为14.248 k D;HPLC柱前衍生化分析其单糖组成,TSP-W中葡萄糖含量占比达99.99%;FT-IR光谱分析表明TSP-W中α-D-葡萄糖的存在,是一种新型葡聚糖;SEM观察其微观结构主要为光滑的碎屑和棒状;采用甲基化分析鉴定出1→)连接葡萄糖残基、(1→4)连接葡萄糖残基、(1→4,6)连接的葡萄糖残基,比例为18∶72.3∶9.6。2.动物实验结果表明,TSP-W可减轻Akt/N-Ros基因诱导的原发性肝癌小鼠肝脏损伤,抑制肿瘤生长,延长患瘤小鼠的生存期;TSP-W可降低小鼠脾脏PD-1+/CD3+T细胞比例和PD-1+/CD8+T细胞比例;TSP-W可提高小鼠脾脏KiErdafitinib细胞培养-67+/CD3+T细胞和Ki-67+/CD8+T细胞比例;TSP-W可降低肝癌小鼠肝脏肿瘤浸润性T细胞表面分子PD-1水平,提高细胞因子Ki-67、IL-2水平。结论:从金果榄中分离的TSP-W为一种新型均一葡聚糖,对Akt/N-Ros基因诱导的原发性肝癌小鼠有一定的保护作用,其抗肿瘤作用可能与逆转T细胞耗竭,提高抗肿瘤免疫能力相关。