膀胱经推拿对腰椎间盘退行性病变模型白兔神经及血管内皮生长因子的影响

背景:腰椎间盘退行性病变(Lumbar Intervertebral Disc Degeneration,LIDD)是以腰部的椎间盘退变(Intervertebral Disc Degeneration,IDD)为根本病理基础的一系列病变。在相应椎间盘(Intervertebral Disc,IVD)中神经和血管的浸入是LIDD的重要特征。推拿治疗LIDD的临床疗效显著,但是其作用机制尚不清晰,亟待进一步研究。目的:探讨膀胱经推拿对LIDD白兔椎间盘组织中神经和血管内皮生长因子及其受体的影响,以及延缓椎间盘退变相关因子的作用机制。方法:将15只雄性新西兰白兔随机分为对照组、模型组和推拿组,每组5只。除对照组外,模型组和推拿组白兔采用经腹膜后间隙穿刺纤维环的方法建立LIDD白兔模型。造模5天后推拿组白兔借鉴“峨眉伤科膀胱经推拿法”,采用按揉法、点按法和弹拨法进行膀胱经推拿干预。对照组和模型组白兔仅抓取固定。HE染色法检测IVD组织病理学形态,ELISA法检测血清中神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)、血浆P物质(Substance P,SP)、降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene-Related Peptid,CGRP)、5-羟色胺(5-HydroxytrlncRNA-mediated feedforward loopyptamine,5-HT)的表达,荧光定量PCR和Western blot分别检测IVD组织中神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)、酪氨酸激酶受体A(Tyrosine Kinase Receptor A,Trk A)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF),及其受体VEGFR1、VEGFR2 m RNA和蛋白的表达。结果:1.白兔一般情况显示:推拿组白兔的精神状态、活动量、皮毛色泽、饮食饮水量以及二便排泄等一般状态优于模型组。2.HE染色结果显示:对照组IVD组织内髓核与纤维环界限清晰、连接紧密无中断,髓核形状规则,髓核内细胞丰富且分布均匀,凝胶状结构中含有大液泡,髓核基质呈正常凝胶状表现,纤维环排列整齐无破裂,呈同心圆状。模NN2211 NMR型组与对照组比较,可见IVD组织内髓核与纤维环互相分离且有中断,髓核形状不规则,髓核细胞数量和泡液显著减少,髓核基质呈中重度凝结状态。推拿组IVD组织内髓核与纤维环连接较紧密有轻度中断,髓核形状较规则,髓核细胞数量略有减少、液泡较少,髓核基质呈轻微凝结状态。病理评分显示:模型组IVD组织病理评分11.20±0.84相较于对照组的4.00±0.00显著升高(P<0.01),推拿组IVD组织病理评分6.60±1.14相较于模LBH589溶解度型组显著降低(P<0.05)。3.ELISA法检测结果显示:模型组白兔血清中NPY(228.50±31.68)、SP(88.32±13.70)、CGRP(1074.32±57.21)、5-HT(108.39±18.01)的表达水平显著高于对照组的表达水平(P<0.01);推拿组白兔血清中NPY(188.41±5.05)、SP(75.21±2.96)、CGRP(840.32±23.22)、5-HT(86.37±2.39)的表达水平显著低于模型组的表达水平(P<0.01,P<0.05)。4.荧光定量PCR法检测m RNA结果显示:模型组白兔IVD组织内NGF(9.37±1.75)、Trk A(1.16±0.07)、VEGF(4.11±0.69)、VEGFR1(7.20±1.86)和VEGFR2(7.33±2.28)的m RNA表达水平显著高于对照组的m RNA表达水平(P<0.01);推拿组白兔IVD组织内NGF(4.70±0.56)、VEGF(3.15±0.33)、VEGFR1(3.20±0.63)和VEGFR2(2.72±0.57)的m RNA表达水平显著低于模型组m RNA表达水平(P<0.01,P<0.05),推拿组白兔IVD组织内Trk A(1.15±0.10)的m RNA表达水平与模型组相比,不具有统计学意义(P>0.05)。5.Western blot法检测蛋白结果显示:模型组白兔IVD组织内NGF(0.65±0.28)、VEGF(2.54±0.03)、VEGFR1(2.56±0.03)和VEGFR2(2.59±0.02)的蛋白表达水平显著高于对照组的蛋白表达水平(P<0.01);推拿组白兔IVD组织内NGF(0.37±0.04)、VEGF(1.70±0.16)、VEGFR1(1.85±0.19)和VEGFR2(1.72±0.31)的蛋白表达水平显著低于模型组的蛋白表达水平(P<0.01,P<0.05)。模型组白兔IVD组织内Trk A(0.24±0.03)的蛋白表达水平与对照组相比,不具有统计学意义(P>0.05)。推拿组白兔IVD组织内Trk A(0.24±0.04)的蛋白表达水平与模型组相比,不具有统计学意义(P>0.05)。结论:1.膀胱经推拿可以显著改善LIDD白兔椎间盘的组织病理形态,减少血清中疼痛相关因子NPY、SP、CGRP、5-HT的表达,减轻炎症表现。2.膀胱经推拿可能通过降低LIDD白兔椎间盘组织中神经和血管内皮生长因子的表达水平,抑制椎间盘内神经和血管的生长,控制LIDD的进一步发展。