目的：研制一种胶体金免疫层析四线卡，可同时检测果蔬中毒死蜱、氟虫腈、克百威、多菌灵4种农药残留。方法：以硝酸纤维素膜为载体，农药竞争抗原为包被抗原，胶体金为标记材料，制备胶体金免疫层析四线卡，并对标记抗体浓度、检测线包被浓度、样品提取剂、提取时间等参数条件进行优化，评价四线卡的灵敏度、特异性、稳定性和准确性。结果：经过优化后四线卡制备工艺参数为毒死蜱、氟虫腈、克百威、多菌灵的最适标记抗体浓度为3.2、2.4、3.2、3.2 μg/mL，T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)抗原包被浓度分别为0.65、0.80、0.65、0.5 mg/mL。毒死蜱检出限为0.1 mg/kg、氟虫腈为0.02 mg/kg、克百威为0.02 mg/kg、多菌灵为0.05 mg/kgCL 318952分子量，除了克百威与丁硫克百威的交叉反应率为20%，毒死蜱、氟虫腈和多菌灵与结构类似物的交叉反应率均小于5%，在室温条件下可保存至少12个月。经验证，对60份果蔬样品检测结果与仪器法检测结果一致。结论：本研究制备的四线卡操作简便、准确度高、Lab Equipment快速、稳定，可以用于果蔬中毒死蜱、氟虫腈、克百威、多菌灵残留的现场快速筛查C59 IC50和检测。