目的 以知母、干姜分别作为清热和温阳治则的代表中药，联合表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）代表药物吉非替尼，探索寒、热不同药性中药对PI3K/AKT通路异常激活介导的非小细胞肺癌（NSCLBMS-354825C）耐药细胞生长及代谢的影响。方法 采用三维（3D）法培养PC-9-PIK3CA-Mutation(PC-9-PIK3CA-M,EGFR 19外显子突变合并PIK3CA突变）细胞和H1650(EGFR突变合并PTEN缺失）细胞，作为PI3K/AKT通路异常活化导致的EGFR-TKIs（吉非替尼）耐药模型。NSCLC-3D细胞分组：对照组、知母组、干姜组、吉非替尼组、吉非替尼+知母组、吉非替尼+干姜组。知母、干姜冻干粉浓度均为3 200μg·mL~(-1)，吉非替尼浓度为20μmol·L~(-1)，干预24 h。采用ATP法检测细胞活性；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；活性氧（ROS）荧光探针法检测细胞ROS水平。结果 （1）在PC-9-PIK3CA-M-3D和H1650-3D细胞中，与对照组比较，10～80μmol·L~(-1)吉非替尼能显著抑制细胞活力（P<0.01）；与吉Aerobic bioreactor非替尼组比较，吉非替尼+知母能显著抑制细胞活力（P<0.01），吉非替尼+干姜能显著促进细胞活力（P<0.05,P<0.01）。知母能协同促进吉非替尼的抗肿瘤作用，而干姜则拮抗吉非替尼的抗肿瘤作用。（2）在PC-9-PIK3CA-M-3D细胞中，与对照组比较，吉非替尼对细胞凋亡无显著影响（P>0.05），吉非替尼+知母能显著促进细胞凋亡（P<0.01），而吉非替尼+干姜能显著抑制细胞凋亡（P<0.05）；与吉非替尼组比较，吉非替尼+知母能显著促进细胞凋亡（P<0.01）。在H1650LGK-974采购-3D细胞中，与对照组比较，吉非替尼和吉非替尼+干姜对细胞凋亡无显著影响（P>0.05），吉非替尼+知母可显著促进细胞凋亡（P<0.01）；与吉非替尼组比较，吉非替尼+知母可显著促进细胞凋亡（P<0.01）。（3）在PC-9-PIK3CA-M-3D细胞中，与对照组比较，吉非替尼组细胞线粒体ROS水平明显降低（P<0.05）；在H1650-3D细胞中，与对照组比较，吉非替尼组细胞线粒体ROS水平无明显变化（P>0.05）。在PC-9-PIK3CA-M-3D和H1650-3D细胞中，与对照组比较，吉非替尼+知母组细胞粒体ROS水平明显升高（P<0.05,P<0.01），吉非替尼+干姜组细胞线粒体ROS水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。与吉非替尼组比较，吉非替尼+知母组细胞线粒体ROS水平显著升高（P<0.01）。结论 清热药知母可能通过上调线粒体ROS水平，进而促进氧化应激诱导的细胞死亡，逆转PI3K/AKT通路异常活化介导的吉非替尼耐药，而温阳药干姜可能通过下调线粒体ROS水平而部分拮抗吉非替尼的抗肿瘤作用。