【目的】从有效性和安全性两方面评价睡菜(Menyanthes trifoliata L)提取物的镇静催眠作用,重点考察其对睡眠结构的影响,并且从γ-氨基丁酸(gamma aminobutyric acid,GABA)受体和五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)神经递质初步探究其机制。【方法】1.睡菜E7080化学结构的提取及成分分析使用65%乙醇回流提取睡菜干燥茎叶并真空干燥,得到睡菜提取物浸膏粉,作为后续实验使用药物。利用液相色谱-质谱联用技术(Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)初步鉴定提取物主要成分。2.睡菜提取物的急性毒性实验采用急性毒性实验方法,从行为状态、体重变化、摄食情况、饮水情况、脏器形态、脏器系数及肝肾功能等方面评价睡菜提取物的安全性。3.睡菜提取物的镇静催眠作用及机制研究一方面,通过旷场实验(Open field test,OFT)评价睡菜提取物的镇静效应,通过戊巴比妥钠协同诱导翻正反射实验及咖啡因、对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine,PCPA)诱导失眠动物模型评价其催眠效应,通过脑电图检测技术评价其对睡眠结构的影响。另一方面,采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbentgenetic sequencing assay,ELISA)检测前额叶皮质中的GABA的含量和海马中的5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)、5-HT的含量,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测下丘脑中GABAA受体的表达,初步探究其发挥镇静催眠作用的机制。【结果】1.Imidazole ketone erastin半抑制浓度睡菜的提取及成分分析1 kg干燥睡菜茎叶经提取后得94.8 g提取物,得率为9.48%,以黄酮和酚酸类成分为主。2.睡菜提取物的急性毒性实验给予30 g/kg睡菜提取物(相当于316.46 g/kg生药)后,小鼠未出现死亡、昏睡、惊厥震颤等,14天内的一般情况、体重、饮水量及摄食量未见明显异常,血丙氨酸氨基转移酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐指标正常(P>0.05)。3.睡菜提取物的镇静催眠作用及机制研究睡菜提取物能够减少小鼠在OFT中的活动路程和穿越格子数(P<0.05),提高戊巴比妥钠协同诱导翻正反射实验中小鼠的睡眠比率(P<0.001)、缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0.001)和延长小鼠的睡眠时间(P<0.05),改善咖啡因(P<0.001)、PCPA(P<0.001)所致失眠小鼠的睡眠。脑电图结果显示睡菜提取物能够提高小鼠的慢波睡眠(slow-wave sleep,SWS)(P<0.05)和减少睡眠破碎程度即睡眠期间的W→N(WAKE→NREM)、N→W(NREM→WAKE)、N→R(NREM→REM)、R→W(REM→WAKE)转换次数减少(P<0.05)。此外,睡菜提取物提高小鼠前额叶皮质内GABA的含量(P<0.05)、海马中5-HT和5-HIAA(P<0.05)的含量以及增加小鼠下丘脑中GABAA受体的表达(P<0.05)。【结论】1.睡菜乙醇提取物的提取率为9.48%,成分以酚酸和黄酮类物质为主。2.睡菜提取物在30g/kg的剂量下,未出现急性毒性。3.睡菜提取物能够改善睡眠,调节睡眠结构,其作用与调节GABAA受体和5-HT神经递质有关。