游离线粒体拷贝数检测方法建立及应用

目的:线粒体在生理和病理过程中都起着重要作用,线粒体破碎后形成的游离线粒体与一系列疾病密切相关。然而,人体内游离线粒体的含量较低很难被稳定抽提且易降解等因素导致游离线粒体拷贝数检测具有极大挑战。本研究拟建立一selleckchem Gefitinib-based PROTAC 3种快速、准确检测外周血游离线粒体拷贝数定量PCR技术。方法:通过多重荧光定量PCR技术在SLAN?-96S全自动医用PCR分析系统上检测人外周血游离线粒体拷贝数,构建新的游离线粒体检测方案。游离核基因在人体外周血中的稳定性远大于游离线粒体,因此使用多拷贝参考基因YH-1(300拷贝)检测游离核基因作为对照组。结果:成功建立了核基因标准曲线和线粒体标准曲线,并筛选游离线粒体拷贝数检测最佳引物扩增片段长度为82bp、血清有效分离时间在2h内、血清最佳分离方案为1600 r/min离心10 min再16000 r/min离心10 min、磁珠法游离核酸抽提试剂盒抽提游Protein-based biorefinery离核酸得率最高的新流程。利用新方案对100例不同年龄段的随机人群外周血抽提游离线粒体拷贝数进行检测,结果显示30-79岁游离线粒体拷贝数与年龄之间的相关性参数为|R|=0.18、P value=0.077,游离线粒体拷贝数与性selleck HPLC别之间的相关性参数为|R|=0.27、P value=0.061即游离线粒体拷贝数与年龄和性别均无显著相关性,研究结果与报道一致。结论:表明优化后的方案可稳定检测游离线粒体拷贝数,提供了一种快速、准确检测游离线粒体拷贝数的方法。