目的探索新型还原响应纳米四价铂——NP@Pt(Ⅳ)的抗卵巢癌作用。方法合成还原响应的聚合物载体,与四价铂—Pt(Ⅳ)组装形成NP@Pt(Ⅳ)。电感耦合等离子体质谱检测NP@Pt(Ⅳ)在还原环境下的铂释放情况,以及经顺铂、Pt(Ⅳ)和NP@Pt(Ⅳ)处理后的卵巢癌ES2细胞www.selleck.cn/products/Nolvadex中的铂含量。四甲基偶氮唑蓝法(MTT)和流式细胞术检测顺铂、Pt(Ⅳ)和NP@Pt(Ⅳ)对卵巢癌细胞的增殖抑制能力和促凋亡作用。小动物活体成像观察花菁染料7.5(Cy7.5)标记的NP@Pt(Ⅳ)在高级别浆液性卵巢癌人源性肿瘤异种移植(PDX)小鼠体内的生物分布。PDX小鼠尾静脉注射PBS、顺铂和NP@Pt(Ⅳ),测量各组小鼠的肿瘤体积和重量,采用苏木素-伊红(H&E)染色、原位末端标记(TUNEL)荧光染色和Ki67免疫组化染色检测肿瘤组织的坏死、凋亡和细胞增殖情况。测量各组小鼠的体重变化和主要器官的H&E染色情况。结果NP@Pt(Ⅳ)在还原环境中48小时后的铂释放量为76.29%,明显高于非还原环境中的26.82%(P<0.001)。经NP@Pt(Ⅳ)处理1小时、4小时、7小时后ES2细胞内铂含量明显高于Pt(Ⅳ)和顺铂(P<0.001)。NP@Pt(Ⅳ)对卵巢癌ES2、A2780、A2780DDP 细胞的半抑制浓度分别为 1.39μM、1.42μM、和 4.62 μM,低于 Pt(Ⅳ)(2.89 μM、7.2sandwich bioassay7 μM、和 16.74μM)和顺铂(5.21 μM、11.85 μM、和71.98 μM)。经NP@Pt(Ⅳ)处理的ES2细胞凋亡率为(33.91±3.80)%,明显高于 Pt(Ⅳ)[(16.28±2.41)%,P=0.010]和顺铂[(15.01±1.17)%,P=0.017]。Cy7.5@NP@Pt(Ⅳ)可靶向蓄积Cell Cycle抑制剂于PDX小鼠肿瘤组织。经NP@Pt(Ⅳ)治疗后的小鼠肿瘤体积为130±98mm3,明显低于对照组(1349±161 mm3,P<0.001)和顺铂组(715±293 mm3,P= 0.020)。NP@Pt(Ⅳ)组的小鼠瘤重为 0.17±0.09 g,明显低于对照组(1.55±0.11 g,P<0.001)和顺铂组(0.82±0.38 g,P=0.029)。肿瘤组织染色结果显示,相较顺铂,NP@Pt(Ⅳ)治疗后的小鼠肿瘤组织有更明显的坏死和凋亡,Ki67表达量减少。NP@Pt(Ⅳ)组的小鼠体重变化较对照组无明显差异(20.87±0.79g vs.18.56±2.04g,P=0.063),心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏主要脏器H&E染色未见明显异常。结论本研究制备的还原响应纳米四价铂——NP@Pt(Ⅳ),可靶向蓄积于肿瘤组织,促进铂在卵巢癌细胞内的累积,具有较强的抗卵巢癌作用。目的构建可引发铂聚合的新型四价铂纳米药物,探讨其对卵巢癌的化疗以及免疫治疗的增效。方法本研究通过氧化变价的方法制备一种具有聚合功能的四价铂前药IM-Pt(Ⅳ),合成含偶氮键的热敏高分子P1,包裹IM-Pt(Ⅳ)和光热剂P2形成新型纳米四价铂药NPPt/Azo/PTT。试管水平检测NPPt/Azo/PTT的表征以及在近红外二区光激发下(NpPt/Azo/PTT+L)能否发生聚合反应。细胞水平验证NpPt/Azo/PTT+L能否发生聚合反应。四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、AnnexinV-FITC/PI双染法、流式细胞术检测对NpPt/Azo/PTT+L卵巢癌细胞的增殖抑制能力和促凋亡作用。检测NPPt/Azo/PTT+L对卵巢癌细胞免疫原性细胞死亡的诱导。小动物活体成像观察花菁染料7.5(Cy7.5)标记的NP@Pt(Ⅳ)在高级别浆液性卵巢癌人源性肿瘤异种移植(PDX)小鼠体内的生物分布。检测NPPt/Azo/PTT+L对PDX小鼠的抑瘤作用。流式细胞术检测小鼠淋巴、脾脏和肿瘤组织中相关免疫细胞的数量。结果(1)成功构建了集聚合功能的四价铂前药IM-Pt(Ⅳ),含偶氮键的热敏高分子P1,光热剂P2于一体的新型纳米四价铂药NPPt/Azo/PT;(2)试管水平验证了NPPt/Azo/PTT在1064nm光照下具有良好的光热性能,P2在热条件下裂解、产生碳自由基并释放IM-Pt(Ⅳ),IM-Pt(Ⅳ)进一步可发生聚合反应;(3)细胞水平验证了 NPpt/Azo/PTT在1064nm光照下可在细胞内发生聚合反应,减少卵巢癌细胞内铂外排,ES2细胞内铂含量增加,γ-H2AX表达量升高。MTT实验Annexin V-FITC/PI双染实验和流式细胞术结果提示NPPt/Azo/PTT+L可有效抑制多种卵巢癌细胞的增殖、促进卵巢癌细胞的凋亡;(4)NpPt/Azo/PTT+L可促进ES2细胞钙网蛋白(CRT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、三磷酸腺苷(ATP)的释放,诱导免疫原性细胞死亡(ICD)效应;并可促进小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)成熟。.(5)NPPt/Azo/PTT+L可有效抑制卵巢癌PDX小鼠肿瘤的生长(6)NPPt/Azo/PTT+L可改变卵巢癌肿瘤免疫微环境,促进树突状细胞(DCs)的成熟和CD8+T细胞表达,抑制肿瘤相关巨噬细胞、调节性T细胞、髓系来源抑制细胞免疫抑制细胞表型。(7)NPPt/Azo/PTT+L联合抗PD-L1单抗可进一步促进肿瘤组织CD8+T细胞的浸润。结论:本研究成功设计出在近红外光二区激发下可在卵巢癌细胞内发生聚合反应的纳米四价铂NPPt/Azo/PTT,在近红外光的照射下,可以通过减少铂的细胞外排,促进DNA损伤,增强铂药化疗疗效。同时激活ICD效应,重塑卵巢癌免疫微环境,提高抗PD-L1单抗的免疫治疗作用。