背景:高血压是我国发病率最高的慢性病之一,已成为城乡居民心脑血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)死亡的最重要危险因素,但其控制率总体仍处于较低水平。高盐膳食作为高血压发病的危险因素之一,是我国居民长期以来的饮食特点。鉴于我国CVD负担持续增长,如何通过改善我国人群饮食习惯,从而有效提高高血压防治效率、降低心血管疾病负担,已成为我国亟待解决的社会医疗问题。目的:本研究通过用富钾盐替代正常盐对养老院人群进行饮食干预,以探究长期低钠高钾饮食对人群血压控制及远期死亡率的影响,为进一步完善我国高血压防治工作提供建议。方法:本研究是一项多中心随机对照干预研究,将中国北方29家养老院中人群随机分为2组:常规盐组以含约100%氯化钠的食盐为烹饪原料;富钾盐组则用含49%的氯化钾和49%的氯化钠的低钠高钾盐代替常规盐。对入组人群分别进行血压分析试验和生存分析试验,其中血压分析试验纳入对象为研究初始阶段入住养老院人群,且需符合以下条件:年龄在≥40岁、由养老院提供三餐、无明显肾脏功能损害、无需限制钾摄入;生存分析试验纳入对象包括所有在养老院居住满足6个月及以上的居民。在试验干预开始后进行为期60个月的随访调查,期间完成调查问卷填写并收集受试者血压、血液样本及尿液样本(24小时尿及晨尿),测量血生化、尿钠钾比(Na+/K+)等指标,收集主要终点事件发生情况,包括全因死亡,心血管疾病相关死亡,卒中相关死亡。同时对研究人群以年龄为特征进行亚组分析(40-70岁及>70岁),比较不同年龄亚组人群中终点事件发生情况。结果:共有1784名居民被纳入血压分析试验,其中常规盐组874名,富钾盐组910名。与基线资料相比,研究结束时富钾盐组24小时尿Na+/K+水平明显减低(3.5±2.5 vs 10.8±2.9,P<0.001)。随访期间,富钾盐组24h尿Na+/K+水平均低于常规盐组。经年龄和性别校正后,相较于常规盐组,富钾盐组收缩压(β:-5.01,95%CI:-6.63 至-3.39;P<0.001)和舒张压(β:-1.89,95%CI:-2.72 至-1.07;P<0.001)水平显著降低。共有3543名居民被纳入生存分析试验,其中常规盐组1887名,富钾盐组1656名。随访期间,与常规盐组相比,富钾盐组的全因死亡率显著降低(28.8%vs 31.2%,HR:0.88,95%CI:0.78 至 0.99;P=0.044),但在心血管相关死亡及卒中相关死亡方面无统计学差异。亚组分析结果显示,在40-70岁年龄组中,富钾盐组相较于较常规盐组而言,前者全因死亡率(28.9%vs 31.5%,HR 0.78,95%CI:0.63 至 0.96;P=0.022)、心血管疾病相关死亡率(13.8%vs 16.4%,HR 0.66,95%CI:0.49 至 0.90;P=0.009)和卒中死亡率(9.9%vs 11.9%,HR 0.68;95%CI:0.47至0.98;P=0.039)显著降低。而在>70岁人群中,二组之间主要终点事件无统计学差异。结论:本研究结果表明,长期食用富钾盐可有效降低我国人群尿Na+/K+比值及血压水平,并显著改善40-70岁人群远期生存预后。这些结果为我国高血压的防治工作提供了一种新的个体化方案。目的:构建肠道特异性敲除Cckbr基因小鼠模型(Cckbrfl/fl villin-Cre),分析其表型并探讨肠道Cckbr通过钠吸收调节血压的病理机制。方法:肠道特异性敲除Cckbr基因小鼠通过C57BL/6 Cckbrfl/fl与C57BL/6 villin-Cre小鼠交配获得。2月龄大的肠道Cckbr条件性敲除小鼠(Cckbrfl/fl villin-Cre,CKO)和对照组小鼠(Cckbrfl/fl,WT)分别用正常盐(0.4%NaCl)饲料或高盐(4%NaCl)饲料喂养6周,期间定期用无线电遥测法监测血压的情况。实验终止时,用颈动脉插管法测量小鼠血压,用电解质分析仪和酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定尿及肠道内离子、尿肌酐、血浆肾素-血管紧张素-醛固酮(Renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)含量;用蛋白印记法检测心、肾靶器官损伤标记物MMP2和MMP9的表达水平;苏木精-伊红染色(Haematoxylin-eosin staining,HE)、马松及免疫组化染色检测小鼠心、肾靶器官损伤。小鼠肠道灌流实验后用蛋白印记法及免疫荧光染色检测钠离子转运体(Na+/H+exchanger 3,NHE3;Epithelial sodium channel,ENaC;Na+-K+-2Cl-cotransporter,NKCC1)的表达及定位。高盐喂养的肠道Cckbr条件性敲除高血压小鼠进一步每天腹腔注射氢氯噻氢(Hydrochlorothiazide)治疗一周,以腹腔注射等量生理盐水作为对照,监测血压变化情况,实验终止时取尿和血,测量尿内离子、肌酐、尿素氮及血RAAS含量,病理学染色观察肾脏损害变化。结果:肠道Cckbr条件性敲除小鼠经高盐喂养后出现血压升高、十二指肠钠离子吸收增多、尿钠排泄增加,且可造成肾脏损nerve biopsy害。同时,肠道NHE3、ENaC及NKCC1表达增加。氢氯噻氢治疗可有效缓解高盐引起的钠吸收增加所致的小鼠血压升高,但未观察到明显的组织病理学改变。结论:小鼠肠道Cckbr缺失在诱导盐敏感性高血压Belumosudil核磁的发展发生中起到关键的作用,且用噻嗪类利尿剂治疗能够改善其表型。因此Cckbr条件性敲除小鼠为研究肠道钠吸收引起盐敏感性高血压的机制提供了稳定的小鼠动物模型,也为盐敏感性高血压的临床治疗提供了思路。目的:Kv1.3是电压门控钾离子通道家族中延迟整流器类(The delayed reBafilomycin A1细胞培养ctifier class)亚家族Kv1的第三成员,其通过介导K+离子外流在细胞的静息膜电位、细胞凋亡、分化、增殖、体积以及白细胞的激活等生命活动发挥重要调控作用。Kv1.3功能异常与多种疾病,如肥胖症、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病、肝炎、神经炎和肿瘤密切相关联,其被认为是治疗炎症相关疾病的重要靶点。但Kv1.3介导的钾离子外流是否在高血压等心血管疾病中发挥作用尚不清楚。本研究通过利用CRISPR/Cas9技术构建kv1.3全身性基因敲除小鼠,以探讨抑制kv1.3在血压调控中的作用,并从分子水平上解析其可能的作用机制。方法:采用CRISPR/Cas9技术构建全身性Kv1.3基因敲除小鼠(KO,Kv1.3-/-),以野生型C57BL/6小鼠(WT,Kv1.3+/+)为对照。随机取实验组及对照组28周龄的小鼠,在代谢笼中收集每只小鼠的尿液,用电解质分析仪和ELISA法检测尿电解质(钠、钾、氯)、尿蛋白及肌酐。测量体重后在2%异氟醚的吸入麻醉下,用颈动脉插管法测量血压。用电解质分析仪及ELISA试剂盒检测小鼠血浆电解质(钠、钾、氯)、肾素、血管紧张素Ⅱ和醛固酮水平。分别将两组小鼠的肾皮质、肾髓质和肾上腺组织提取RNA用Illumina Hiseq 2000平台进行测序,寻找敲除Kv1.3敲除后差异表达的分子和/或信号通路;用蛋白免疫印迹法测定肾素在肾脏及肾上腺的表达。结果:与野生型C57BL/6小鼠(WT,Kv1.3+/+)相比,Kv1.3基因敲除小鼠(KO,Kv1.-/-)的血浆钾离子浓度减低(KO vs.WT:2.93±0.65 mmol/Lvs.3.64±0.15 mmol/L,P=0.043),而尿钾/肌酐比则未见明显变化。两组小鼠中血、尿(肌酐校正后)中钠、氯离子的水平均无明显差异,尿蛋白/肌酐比也基本一致。Kv1.3基因敲除后小鼠的体重明显下降(KO vs.WT:23.4±1.2g vs.28.0±1.3g,p=0.0004)。与对照组相比,Kv1.3全身敲除小鼠收缩压(KO vs.WT:115.3±9.4 mm Hg vs.87.3±10.2 mm Hg,P=0.0068)和舒张压(KO vs.WT:79.5±2.8 mm Hg vs.63.4±7.4 mm Hg,P=0.0067)明显升高。研究中还发现KO小鼠与WT小鼠相比,肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)异常激活(KO vs.WT:肾素:593.5±67.5 vs.409.9±94 pg/ml,P=0.0075;血管紧张素 Ⅱ:156.6±26.5 vs.78.4±23.0 pg/ml,P=0.0011;醛固酮:349.6±61.6 vs.230.9±50.9 pg/ml,P=0.0106)。RNA测序结果显示两组小鼠肾皮质和肾髓质中的肾素mRNA表达无显著差异,而在肾上腺中KO组小鼠肾素编码基因Ren1mRNA的表达与对照组相比升高2.01倍、醛固酮合成酶的基因Cyp11b2升高1.87倍。此外,Kv1.3敲除小鼠肾上腺中差别表达的基因显著富集在cGMP-PKG、钙信号、MAPK、促性腺激素释放激素(GnRH)信号、肾素的分泌、醛固酮的合成和分泌等信号通路。经蛋白免疫印迹法验证,kv1.3敲除小鼠肾上腺中肾素的表达较野生型组升高,但在肾脏中两组之间表达无显著差异。结论:Kv1.3全基因敲除小鼠可减低血钾浓度,而不增加尿钾排泄和钠、氯离子的吸收和排泄。Kv1.3基因缺乏可降低小鼠体重并诱导小鼠发生高血压。其机制可能是是由于Kv1.3敲除后导致肾上腺而不是肾脏上参与肾素和醛固酮分泌信号通路的激活,从而激活肾素表达增加引起的RAAS系统异常激活所导致。该研究揭示了 Kv1.3在血压维持中的作用和潜在机制,同时提示针对Kv1.3抗炎拮抗剂的应用应关注潜在的引起高血压风险。