发热伴血小板减少综合征病毒Gn蛋白的表达及其免疫原性

目的 通过9型腺相关病毒(adeno-associated virus 9,AAV9)系统表达发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白,并评价其免疫原性。方法 将SFTSV Gn基因重组至病毒载体pAAV-CMV-FH,将构建的重组质粒转染HEK293T细胞,获得重组病毒AAV9-Gn;免疫荧光和Western blot法鉴定Gn蛋白的表达情况。将18只雌性BALB/c小鼠随机分为Mock组(无血清DMEM)、AAV9-GFP组(1×1011vg)和AAV9-Gn组(1×1011vg),各组均经小鼠右后肢肌内注射,100μL/只。连续21 d监测各组小鼠体质量、饮食、行为及精神状态,并计算体质量变化率;于免疫后2、4、8、16周,采用荧光灶减少中和试验(fluorescent reduction neutralization test,FRNT)检测各组小鼠血清中SFTSV中和抗体水平,ELISA法检测AAV9-mediator complexGn组小鼠血清中特异性IgG1和IgG2aselleck激酶抑制剂抗体水平。结果 与特异性抗体孵育显色后,转染AAV9-Gn的Vero细胞于荧光显微镜下可见特异性绿色荧光,且可与小鼠抗SFTSV Gn单克隆抗体发生特异性结合,并于相对分子质量约61 000处可见特异性结合条带。3组小鼠体质量均呈增长趋势,组间差异无统计学意义(F=0.158~2.621,P> 0.05),且饮食、行为及精神状态均表现正常。免疫后2、4、8和16周,AAV9-Gn组小鼠血清中的SFTSV中和抗体效价均明显高于Mock组和AAV9-GFP组(H=13.332~14.538,P均<0.001),且效价峰值出现在第8周;不同时间点小鼠血清中特异性IgG1抗体水平均明显高于IgG2a(F=4.373~12.975,P均<0.05)。结论 通过AAV9表达系统可正确表达SFTSV Gn蛋白,且对小鼠毒性较低,并具有良好的免疫原性,有望作为SFTSV疫苗的候选成Rapamycin molecular weight分。