目的：探讨双氢青蒿素（DHA）在体内对人结直肠癌（RKO）细胞的抗癌活性及体外机制。方法：将40只SPF级雄性裸鼠建立RKO荷瘤小鼠模型，随机分为模型组、顺铂组及DHA高剂量（200 mg/kg）、低剂量（100 mg/kg）组，每组10只；对比各组裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、血清肿瘤坏死因子（TNF-α）水平等；苏木素-伊红（HE）染色观察各组裸鼠肿瘤组织病理学变化；噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（25、50、100μmol/L）DHA干预0、24、48、72 h内对RKO细胞增殖的影响；流式细胞仪、Hoechst 33258检测（0、50、95、150μmol/L）DHA干预48 h后对RKO细胞周期和细胞凋亡的影响；划痕实验观察95μmol/L DHA干预对细胞迁移能力的影响；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DHA对细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax） mRNA表达水平的影响；蛋白质印迹法（Western blot）检测DHA对细胞内Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax以及p38-丝裂原活化蛋白激酶（p38-MAPK）、p-p38-MAPK、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、基质金属蛋白酶（MMP-9）等表达水平的影响。结果：200 mg/kg DHA显著降低肿瘤体积和质量，降低血清TNF-α水平，抑瘤率为41.45%;寻找更多DHA可随浓度的增加而增强对RKO细胞增殖的抑制作用；（50、95、150μmol/L）DHA阻滞RKO细胞周期在G2/M期，且促进RKO细胞凋亡作用随DHA浓度增加而增强；95μmol/L DHA干预12、24 h后可显著降低RKO细胞迁移能力（P<0.01）;95MK-2206体外μmol/L DHA可显著上调RKO细胞内Caspase-3、Caspase-9mRNA表达水平（P<0.01）以及Bax/Bcl-2 mRNA表达比值（P<0.05）;95μmol/L DHA可增加RKO细胞内剪切型Caspase-9(cleaved-Caspase-9)Hepatic injury/Caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白表达（P<0.01），同时降低MMP-9、p-P38 MAPK、p-PI3K、p-Akt及Akt蛋白表达水平（P<0.01）。结论：DHA有较好的抑制结直肠癌作用，其机制可能为抑制MAPK/PI3K/Akt信号通路，触发RKO细胞内源性凋亡，阻止其增殖与迁移。