动物双歧杆菌乳亚种BB69对葡聚糖硫酸钠诱导的实验性小鼠结肠炎的影响作用研究

目的通过给实验性结肠炎小鼠模型灌胃动物双歧杆菌乳亚种BB69活菌菌液,测定小鼠体重变化,疾病活动指数,脾脏指数,结肠长度/重量比值,CD4~+T细胞亚群中Th17/Treg比值,结肠组织损伤镜下评分,肠道紧密连接ZO-1蛋白和Occludin蛋白含量,血清与结肠组织IL-1β、IL-10、IL-17A、IL-22和TNF-α的含量,结肠组织MPO和GSH-Px含量以及小鼠结肠内容物LCN-2含量,以期探索动物双歧杆菌乳亚种BB69确认细节对结肠炎的保护作用并分析其相关的作用机制,为该菌株未来的开发利用提供一定的数据支持与理论依据。方法6周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只,适应性养殖一周后,随机分为健康对照组(NC组),模型组(DSS组),菌组(BB组),药物组(MS组),菌药联合组(BM组)共5个组,每组8只。从实验第0天开始,除NC组给予正常无菌水自由饮用外,其余4组均提供含有2.3%DSS的水溶液自由饮水。在实验的第8天将含2.3%DSS的饮水更换为含0.8%DSS的饮水。同时从第0天开始即进行干预处理,NC组与DSS组小鼠均以0.2 ml生理盐水灌胃,BB组小鼠以0.2 ml含4ⅹ10~9CFU动物双歧杆菌乳亚种BB69活菌菌液灌胃处理,MS组小鼠以0.2 ml 5-ASA溶液灌胃处理,BM组小鼠给予动物双歧杆菌乳亚种BB69活菌菌液和5-ASA溶液各0.1 ml灌胃处理,干预周期为21天。实验过程中采集小鼠粪便、血液、结肠及脾脏network medicine组织,实验结束后利用流式细胞术,组织切片技术,HE染色技术,PAS染色技术,免疫荧光染色技术,ELISA技术对结肠炎小鼠的表观情况,组织状态,免疫表现,氧化水平等方面进行评估分析。结果(1)与DSS组相比,BB组小鼠DAI评分明显下降,肠炎症状基本缓解(P<0.05)。(2)与DSS组相比,BB组结肠长度/重量显著增高(P<0.05),脾脏Enasidenib供应商指数有所降低,但无统计学意义。(3)与DSS组相比,BB组小鼠脾脏单个核细胞分群中Th17细胞比例显著降低(P<0.05),Treg细胞显著升高(P<0.05)。(4)与DSS组相比,BB组小鼠肠道黏膜损伤程度低,隐窝保存完好,炎症细胞浸润明显下降,杯状细胞大量增生,镜下组织学评分明显降低(P<0.05)。(5)与DSS组相比,BB组小鼠肠道ZO-1蛋白和Occludin蛋白含量均明显升高(P<0.05)。(6)与DSS组相比,BB组小鼠结肠IL-1β和IL-17A含量明显下降,而IL-10含量明显升高(P<0.05);TNF-α含量有下降趋势,IL-22含量有上升趋势,但二者均无统计学意义。(7)与DSS组相比,BB组小鼠结肠GSH-Px明显增高(P<0.05),肠道MPO水平有一定程度降低但不明显。(8)与DSS组小鼠相比,BB组小鼠结肠内容物中LCN-2的含量显著降低(P<0.05)。结论动物双歧杆菌乳亚种BB69可以缓解实验性结肠炎小鼠的症状,通过增强肠道黏膜屏障的结构和功能,降低肠道氧化应激损伤,抑制过度激活的免疫,降低炎症水平等机制来保护肠黏膜健康。由此推测动物双歧杆菌乳亚种BB69可能是IBD临床治疗的潜在方式,可以为IBD患者带来福音。