目的研究肠道菌群紊乱对次级胆汁酸代谢、Th17/Treg免疫平衡、自身炎症水平、SLE疾病活动度的影响以及解毒祛瘀滋阴方的疗效机制。方法1.动物实验:将42只MRL/lpr狼疮样小鼠分为模型、激素、中药、中西药、3-oxoLCA、isoalloLCA 及 3-oxoLCA+isoalloLCA 等 7 个组(6 只/组),另选 6 只 MRL/MpJ 小鼠做为正常对照。于第7周开始采取相应药物干预,持续7周。分析脾脏和淋巴结指数,肾脏病理切片进行HE染色、免疫组化C3、免疫荧光IgG分析;ELISA检测血清中抗ds-DNA、ANA、IL-17A和IL-6含量,流式检测脾脏中Th17、Treg细胞比例并计算Th17/Treg 比值;RT-qPCR检测脾脏中ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平及结肠中3α/β-HSD mRNA表达水平;16sRNA基因测序检测小鼠肠道菌群变化;脂质组学检测粪便中3-oxoLCA和isoalloLCA 含量。2.次级胆汁酸3-oxoLCA和isoalloLCA分别调节Th17、Treg分化的体外细胞实验:从MRL/lpr小鼠脾脏分选Na?ve CD4+T细胞,在刺激其分化为Th17或Treg细胞条件下培养,分为激素组、中药组、3-oxoLCA和isoalloLCA组,采用相应药物进行干预96 h后,流式检测Th17、Treg 比例,Western Blot和RT-qPCR分别检测ROR-γt、Foxp3表达和mRNA转录水平。3.肠道菌群调控3-oxoLCA和isoalloLCA代谢的菌群移植实验:12只MRL/lpr小鼠分为模型和SLE粪菌组,另选6只MRL/MpJ小鼠作为正常对照。于第4周用抗生素进行肠道预处理隔日一次,持续3次,于第5周进行菌群移植,隔日一次,持续5次。分析脾脏及淋巴结指数;肾脏病理切片进行HE染色、免疫组化C3、免疫荧光IgG分析;ELISA检测血清中抗ds-DNA、IL-10和TNF-α含量;RT-qPCR检测结肠中3α/β-HSD mRNA表达;16sRUbiquitin-mediated proteolysisNA基因测序检测小鼠肠道菌群的变化;脂质组学检测粪便中3-oxoLCA 和 isoalloLCA 含量。结果1.动物实验结果:与模型组比较,各组小鼠病情缓解(脾脏、淋巴指数降低;肾脏病理损伤减轻);自身性抗体和炎症水平总体显著降低;流式结果表明,各组小鼠脾R428说明书脏Th17、Treg 比例减少,Th17/Treg比值显著降低,相应的ROR-yt mRNA表达下降,Foxp3 mRNA表达升高;16sRNA测序结果表明各组小鼠Beta多样性差异显著,菌群结构存在显著差异,同时3α-HSD mRNA表达升高,3β-HSD mRNA表达无显著差异;另外,脂质组学结果表明,解毒祛瘀滋阴方干预可以增加3-oxoLCA和isoalloLCA含量。2.体外细胞实验结果:流式结果表明,3-oxoLCA可以抑制Th17分化,isoalloLCA可以促进Treg分化;Western Blot结果表明,3-oxoLCA组ROR-yt表达降低,isoalloLCA组 Foxp3 表达升高;RT-qPCR 结果表明,3-oxoLCA 抑制 ROR-yt mRNA 表达,isoalloLCA促进Foxp3 mRNA的表MCC950价格达。另外,复方干预组Th17、Treg分化均无显著变化。3.菌群移植实验结果:与模型组比较,SLE粪菌组小鼠病情加重(脾脏、淋巴指数升高;肾脏病理损伤加重);自身性抗体和炎症水平总体显著升高;16sRNA测序结果表明,各组之间Beta多样性差异显著,肠道菌群结构存在差异;RT-qPCR结果表明,SLE粪菌组3α/β-HSD mRNA表达降低;脂质组学结果表明,SLE粪菌组3-oxoLCA含量有下降趋势。结论1.肠道微生态紊乱导致次级胆汁酸3-oxoLCA、isoalloLCA代谢异常,引起Th17/Treg免疫失衡,在SLE发生发展过程中具有重要的作用。2.解毒祛瘀滋阴方通过有效调节肠道菌群结构和功能,提高3α/β-HSD表达,恢复次级胆汁酸3-oxoLCA、isoalloLCA代谢水平,调控Th17/Treg免疫失衡,降低炎症反应,降低疾病活动度,从而有效缓解病情。