目的:构建永生化人阴道壁成纤维细胞(Human vaginal wall fibroblasts,hVWFs)细胞株,使用大鼠构建阴道壁盆腔器官脱垂(Pelvic organ prolapse,POP)模型,在细胞株和大鼠模型中评Colforsin小鼠估人工细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)改良的盆底重建网片对网片暴露并发症的影响。方法:使用慢病毒在原代hVWFs中过表达hTERT基因,连续培养细胞,使用β-半乳糖甘酶染色法评估细胞衰老。CCK-8实GSK126体外验、EdU实验、划痕实验评估原代和永生化细胞的增殖、迁移能力。使用实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR,qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测永生化的细胞在连续传代过程中关键基因的表达。染色体核型分析鉴定核型稳定性,裸鼠成瘤实验评估永生化的细胞的体内成瘤能力。将9-10周SD雌性大鼠进行卵巢切除,2周后行阴道球囊扩张,扩张后2周、4周、12周进行评估,每次评估进行Masson染色,免疫组织化学染色评估肌纤维、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteins,TIMPs)的表达、天狼星红染色评估胶原表达,WB实验验证蛋白表达差异。使用单轴拉伸试验评估组织生物力学改变。使用同轴静电纺丝技术制备具有聚乳酸内芯和明胶外壳的纳米纺丝,进而制备纳米纤维薄膜作为人工细胞外基质对聚丙烯网片进行改良。将改良的网片植入造模大鼠的阴道壁中,在术后4周、12周进行评估。肉眼观察网片暴露情况,HE染色评估组织形态,免疫组织化学和WB实验评估肌纤维、MMPs和TIMPs的表达量,天狼星红染色和WB实验评估胶原表达。用软件GraphPad进行数据统计分析。结果:过表达hTERT基因的hVWFs相比于原代细胞,细胞衰老比例明显降低(P=0.014)。永生化的hVWFs在连续传代过程中保持了稳定的增殖、迁移能力,关键基因在mRNA水平和蛋白水平保持了稳定的表达,染色体核型在过表达hTERT基因后保持稳定,永生化的细胞在体内不具有致瘤性。卵巢切除后进行球囊扩张的大鼠,相比于对照组大鼠,上皮萎缩、肌纤维紊乱、胶原表达明显减少、MMPs表达升高、TIMPs表达显著降低,基本符合POP的组织病理Proanthocyanidins biosynthesis学特征。生物力学方面,组织在低度形变和高度形变下的刚度均明显上升,符合POP组织的生物力学特征。改良的网片在体外可以明显促进成纤维细胞的增殖(P=0.012)。将改良的网片植入大鼠阴道壁后,与普通聚丙烯网片相比,没有网片暴露的发生。改良网片维持了相对固定的组织学位置,没有突入肌层、突破表皮。改良网片的大鼠阴道壁中胶原含量明显更高,且COL1/COL3的比值更低,说明组织弹性更好。改良网片组的组织中MMPs表达更低、TIMPs表达量更高,说明抑制了胶原的分解代谢。改良网片植入的组织中TGF-β1表达明显升高,Smad3、p38、ERK1/2的磷酸化水平也显著升高(P<0.05)。结论:通过在原代hVWFs中过表达hTERT基因,我们成功构建了永生化hVWFs细胞株。将大鼠切除卵巢后进行阴道壁球囊扩张从而构建大鼠阴道壁POP模型是一种可行的方法。使用人工细胞外基质包被普通聚丙烯网片可以增加生物相容性、减少网片并发症的发生,是一种具有应用前景的减少聚丙烯网片手术并发症的技术。