乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是一种Heart-specific molecular biomarkers人畜共患病,遍及亚太地区,在儿童和老年人中死亡率极高。据信,全世界有近30亿人有患乙脑的风险,每年报告大约20,000例临床病例,导致6,000人死亡。在这些病例中,约有25-30%致死,50%导致永久性神经精神后遗症,只有三分之一的患者完全康复。自乙脑疫苗问世以来,其效力测试一直是一个复杂并具有挑战的过程。噬斑减少中和试验(plaquereduction neutralization test,PRNT)是检测乙脑疫苗效力最常用的方法。它是最可靠、最灵敏、最特异的检测方法,它比较了在小鼠体内诱导中和抗体所需的疫苗量与产生相同效果所需的参考疫苗制剂的量。但其过程相当冗长、费力且技术要求高。进行检测需要大量的动物以及训练有素的工作人员。在本研究的前两章内容,建立了一种乙脑E蛋白的时间分辨荧光免疫检测试剂:1、单克隆抗体的表达及配对筛选;2、建立方法学;3、评估试剂盒的各项性能指标,包括:灵敏度、精密度、准确度、特异性。接种人乳头瘤病毒(HPV)疫苗以预防HPV感染和宫颈癌,其有效性和必要性越来越得到大众认可。15价人乳头瘤病毒疫苗引起了广泛关注,该疫苗可预防世卫组织确定的几乎所有高危型人乳头瘤病毒。然而,随着疫苗效价的不断提高,HPV疫苗生产过程的质量控制面临更多挑战。HPV 68型病毒样颗粒(VLPs)是15价HPV疫苗区别于现有疫苗的独特成分之一,对VLPs的精确质量控制是对疫苗制造商的新要求。本研究建立了一种新型的时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA),用于乙脑灭活疫苗中E蛋白和HPV疫苗中HPV68 VLPs的快速、精确的自动质量控制。本研究采用的两对特异性靶向乙脑E蛋白或HPV68 L1蛋白的鼠源单克隆抗体,均进行了中和试验的筛选鉴定,保证中和抗体对疫苗中有效抗原的结合能力,用具有良好中和效果的抗体建立经典的双抗体夹心方法。其中乙脑E蛋白时间分辨免疫分析试剂盒线性范围为0.78125 IU/mL～25 IU/mL,灵敏度为0.01 IU/mL,分析内变异系数、分析间变异系数均小于10%。稀释回收率在90%～110%之间。HPV68 VLPs时间分辨免疫分析试剂盒线性范围可达1000 HDAC抑制剂ng/mL,灵敏度为0.08 ng/mL,分析内和分析间变异系数均小于10%。稀释回收率范围为90%～110%。除疫苗样品前处理外,整个分析过程均由全自动机器完成,节省了检测时间,避免了人工误差。研究结果显示,该两种新型TRFIA可以高效、可靠地分析乙脑疫苗有效获悉更多抗原含量和HPV68 VLPs。新型TRFIA具有快速、耐用、灵敏度高、准确性高、检测范围宽和特异性好等优点。有望为各型别VLPs的质量控制提供一种新的检测方法。综上所述,新型TRFIA在乙脑疫苗和HPV疫苗质量控制中具有重要的应用价值。