中华绒螯蟹甲壳肽Es Crus3和Es Crus4表达模式与免疫功能

研究从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)中克隆并鉴定了两个Ⅰ型甲壳肽(Crustin)基因,分别命名infant infection为Es Crus3和EsCrus4。随后通过生物信息学、基因表达分析、蛋白表达与纯化、免疫功能验证等研究手段,分析了这2个新型抗菌肽的表达、结构和功能。EsCrus3的cDNA序列全长567 bp,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为351 bp,编码116个氨基酸(Amino acid, aa); EsCrus4序列全长743 bp, ORF区288 bp,编码95个aa。两者都含有信号肽、富半胱氨酸的结构域(Cysteine-rich region, CRR)和WAP(Whey acidic protein)结构域。Es Crus3和Es Crus4氨基酸序列的一致性仅为30.77%,并且进化分析显示Es Crus3和Es Crus4分别位于两个具有分类意义的分支上,提示两者生物学功能可能存在差异。EsCrus3和EsCrus4均在卵巢中高度表达且具有相似的表达水平,在金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激时呈上调表达趋势,其中EsCrus3响应速度更快,在刺激2h时上调表达, EsCrus4则在刺激后12—24h时显著上调。重组蛋白Es Crus3和Es Crus4对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均具有不同程度的结合活性,并且对不同微生物多糖结合活性也存在明显差异。Es Crus3对革兰氏阳性菌的肽聚糖(PGN)和脂磷壁酸(LTA)具有很高结合活性,对革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)和真菌β-葡聚糖也有一定结合活性,而Es Crus4只对PGN具有显著结合活性。上述研究结果表明EDecitabine NMRsCrus3响应病原刺激更迅速、与病原多糖结合能力更强,提示其在卵巢的免疫防御体系中发挥更重要作用。此外, Eselleck Emricasans Crus3和Es Crus4序列和功能的差异为新型药物的挖掘提供了基础数据。