目的:通过研究α-viniferin在抗高尿酸血症、对高尿酸血症引起的肾损伤的保护作用和抗痛风性关节炎方面的作用,探讨α-viniferin抗痛风的作用机制。方法:(1)将小鼠随机分为六组(n=10):正常对照组(Control组)、高尿酸血症组(HUA组)、别嘌呤醇组(ALLOP组)和α-viniferin的低剂量(VINIFL)、中剂量(VINIFM)和高剂量(VINIFH)组。建立氧嗪酸钾(PO)和次黄嘌呤(HX)诱导的高尿酸血症小鼠模型,探究α-viniferin的降尿酸作用及作用机制,结合转录组学分析其对高尿酸selleck合成血症引起的肾损伤的保护作用。检测指标包括:生化分析检测血清尿酸(SUA)、尿尿酸(UUA)、血清肌酐(SCRE)、尿肌酐(UCRE)、血清尿素氮(SBUN)水平,计算尿酸排泄指数(FEUA),血清和肝脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)活力。记录小鼠体重和计算小鼠脏器系数(肾脏系数、肝脏系数和脾脏系数)。Western blot检测肝脏中XOD蛋白和肾脏中葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)Fasciotomy wound infections、尿酸转运蛋白1(URAT1)、ATP转运蛋白G2(ABCG2)和有机阴离子转运蛋白1(OAT1)的表达。HE染色法观察肾脏组织病理学改变。转录组学分析肾脏保护作用的信号通路和关键机制,并通过RT-PCR对转录组基因进行验证。(2)将小鼠随机分为六组(n=10):正常对照组(Control组)、急性痛风性关节炎组(MSU组)、秋水仙碱组(COL组)和α-viniferin的低剂量(VINIFL)、中剂量(VINIFM)和高剂量(VINIFH)。采用足底注射MSU的方法建立尿酸钠(MSU)诱导的小鼠急性痛风性关节炎模型,探究α-viniferin的体内抗痛风作用,检测指标包括:采用游标卡尺测量不同组别小鼠足肿胀情况,ELISA法检测爪足组织中TNF-α以及IL-1β水平,HE染色法观察爪足组织病理学状态。用MSU诱导LPS致敏的THP-1细胞,建立体外痛风性关节炎模型,采用CCK-8法测定不同浓度α-viniferin对THP-1细胞的细胞毒性Trichostatin A说明书,以确定其安全性。PI染色法检测细胞膜完整性,ELISA法检测炎症因子(IL-1β、TNF-α)的分泌量,Western Blot法检测炎症相关蛋白(IL-1β、ASC、Caspase 1、NLRP3)的表达。结果:(1)生化分析结果显示,与Control组小鼠相比,HUA组小鼠的SUA水平显著升高(P<0.01),UUA水平显著(P<0.01)降低,SCRE水平显著(P<0.01)升高,UCRE水平显著(P<0.01)降低,SBUN水平显著升高(p>0.05),显著(P<0.01)抑制了FEUA,显著(P<0.01)升高肝脏和血清中XOD活性。与HUA组小鼠相比,,VINIFL、VINIFM和VINIFH组小鼠的SUA水平显著降低(P<0.05),VINIFH和VINIFM组UUA水平显著(P<0.01)升高,VINIFH组的SCRE水平显著(p>0.05)降低,VINIFM和VINIFH组尿肌酐UCRE水平显著(p>0.05)增加。此外,α-viniferin组以剂量依赖的方式显著(P<0.01)增加FEUA,α-viniferin组血清和肝脏中XOD活性显著(P<0.01)降低。小鼠体重和计算小鼠脏器系数结果显示,与Control组小鼠相比,别嘌呤醇组小鼠体重显著(P<0.01)下降,α-viniferin组对小鼠体重的增长没有影响(p>0.05),HUA组和ALLOP组肾脏系数(分别为1.48%,1.74%)显著(P<0.01)提高,α-viniferin各剂量组中肾脏系数无明显统计学差异(p>0.05)。Western blot显示,与Control组相比,HUA组XOD、GLUT9和URAT1的表达显著(P<0.01)上调,OAT1和ABCG2蛋白表达显著(P<0.01)下调,与HUA组相比,α-viniferin各剂量组的XOD、GLUT9和URAT1的表达显著(P<0.01)下调,OAT1和ABCG2蛋白表达显著(P<0.01)上调。HE染色结果显示,在HUA组中,观察到一些炎症细胞向肾小球浸润,HUA组出现重度肾水肿和肾小管严重扩张,并观察到大量炎症细胞向肾小球浸润,而α-viniferin各剂量组有不同程度的改善。通过转录组学分析,揭示了参与小鼠肾脏保护作用的关键机制与IL-17、趋化因子信号和PI3K-AKT信号通路有关。其中基因S100-A9(S100A9)、C-C趋化因子受体5型(CCR5)、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基5(PIK3R5)、toll样受体2亚型X1(TLR2)和整合素α-4前体(ITGA4)基因在给予α-viniferin后显著下调,表明其可能与α-viniferin保护高尿酸血症引起的肾损伤的机制有关。(2)小鼠急性痛风性关节炎模型结果表明:与Control组相比,造模后4h,MSU组小鼠足肿胀度显著增加(P<0.01),并在24h时足肿胀度达到最大值,同时爪足组织中的TNF-α和IL-1β水平明显增加(P<0.01),HE染色可观察到大量炎性细胞浸润。与MSU组相比,α-viniferin给药组能够显著降低小鼠足肿胀度(P<0.01或P<0.05),降低爪足组织中TNF-α和IL-1β水平(P<0.01或P<0.05),减少炎性细胞的浸润。MSU诱导LPS致敏的THP-1细胞构建体外痛风模型,对α-viniferin的抗痛风作用机制分析。结果表明:α-viniferin能够剂量依赖性的降低MSU诱导的体外痛风模型中IL-1β和TNF-α水平(P<0.01或P<0.05),并能够抑制IL-1β、ASC、Caspase-1和NLRP3蛋白的表达。同时α-viniferin能够改善该模型中细胞表面形态,减少PI染色细胞数。结论:α-Viniferin具有明显的抗高尿酸血症活性,并显著降低高尿酸症小鼠的血清尿酸水平,其发挥抗高尿酸血症的机制包括抑制XOD活性和下调XOD的蛋白表达从而抑制尿酸的产生,上调OAT1和ABCG2、下调GLUT9和URAT1蛋白的表达促进高尿酸血症小鼠的尿酸排泄。α-Viniferin减轻了小鼠的肾损伤,这表现为血清肌酐(SCRE)和血清尿素氮(SBUN)水平的降低,以及肾组织学的改善,其保护机制可能是通过调节IL-17、趋化因子和PI3K-AKT信号通路来逆转高尿酸血症引起的肾损伤。这表明α-viniferin是一种很有前途的抗高尿酸血症药物,具有较好的安全性。α-Viniferin可抑制痛风性关节炎,其机制可能与抑制炎症因子TNF-α和IL-1β的分泌有关。同时,其机制还与保护细胞膜完整性、改善细胞形态、以及下调NLRP3,Caspase-1,ASC和IL-1β的蛋白表达有关。α-viniferin可能是治疗痛风性关节炎的有效药物。综上,α-viniferin可能是通过多靶点作用有效治疗痛风及高尿酸血症的药物。