MAPK信号通路

背景与目的脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种罕见的遗传性神经肌肉病,通常是由染色体5q13.2上的运动神经元存活基因1(Survival motor neuron 1,SMN1)发生纯合缺失或其他双等位基因致病性变异,导致SMN蛋白水平不足、脊髓前角α运动神经元及低位脑干运动神经元退行性变。主要表现为进行性肌无力、肌张力低下和肌肉萎缩,发病率约为1/11000,人群携带率为1/72～1/47,是最常见的婴幼儿致死性遗传性神经肌肉病。SMA的药物治疗取得了极大进展,诺西那生(Nusinersen)是一种改良的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO),通过增加SMN1的补救基因SMN2的完整表达以增加SMN蛋白量,从而达到治疗目的。该药已获得美国FDA批准用于SMA患者的治疗,并在2019年在我国全年龄段的SMA患者中获得批准。然而,由于价格高昂,其临床应用受到了限制,直至2022年1月,诺西那生大幅度降价并进入我国国家医保,越来越多的SMA患者接受了该药治疗。本研究的主要目的是获取我国青少年及成人SMA患者接受诺西那生治疗的真实数据,以评估其疗效和安全性,并为我国SMA患者的诊疗管理提供重要参考。对象与方法本项为双中心、前瞻性、观察性研究。纳入2022年1月至2022年10月在山东大学齐鲁医院中心院区及青岛院区神经内科接受诺西那生规范治疗的青少年及成人SMA患者,治疗随访时间至少为6个月,最长为10个月。收集纳入患者的一般临床资料、临床特点及基因检查报告,并在应用诺西那生治疗的第0、2、6和10月时对其完善Hammersmith 功能性运动扩展量表(Hammersmith Functional Motor Scale Expanded,HFMSE)、修订版上肢模块(Revised Upper Limb Module,RULM)、肌萎缩侧索硬化症功能评分量表(Amyotrophic lateral Sclerosis Functional Rating scale revised,ALSFRS-r)评估,另外对可行走的患者进行6分钟步行测试(6-Minute Walk Test,6MWT)。同时进行肺功能、复合肌肉动作电位(Compound Muscle Action Potential,CMAP)波幅、脑脊液蛋白、骨密度及身体成分的检测。将收集到的数据整理后进行统计学分析。结果:1.截至2023年2月28日,完成6个月随访评估的患者有共有29例,其中有19例患者治疗达10个月。主要临床特征:男性21例,女性8例;临床分型:2型9例(31.0%),3型18例(62.1%),4型2例(6.9%)。平均起始治疗年龄为26岁。可行走的患者有8例(27.6%),可维持站立有2名(6.9%),可保持独坐的有8例(27.6%),只能卧床的有11例(27.9%)Biocontrol fungi。中重度脊柱侧弯患者15例(51.7%),舌肌纤颤的患者有11例(37.9%)。2.对比基线HFMSE中位评分13.00(3.00-36.00),治疗开始后第2个月16.00(6.00-38.50)、第6个月中位评分为22.00(9.00-33.50)和第10个月中位数为16.00(7.00-44.00),均有明显提升。治疗第2个月时29例患者中有9例(31%),6个月时29例患者中有13例(44.8%),10个月时19例患者中有7例(36.8%)的HFMSE评分有临床意义改善。3.与基线RULM中位评分22.00(9.00-33.50)对比,治疗开始后的第2个月24.00(11.50-35.00)、第 6 个月 27.00(13.50-36.00)和第 10 个月 23.00(17.00-36.00),均有明显提升。在治疗2个月时,29例患者中有11例(37.9%)的RULM评分有临床有意义的改善,治疗6月时有14例(48.3%),10个月时19例患者中有8例(42.1%)。4.根据患者的临床分型,有无行走能力,脊柱侧弯程度,有无关节挛缩,有无舌肌震颤分成了各亚组,对其治疗2月、6月、10月的运动功能评分变化进行对确认细节比,组间并未见明显差异性。5.共9名可行走的SMA患者在治疗2月和治疗6月时与基线相对比,患者6MWT的步行距离平均提升分别为33.11米和52.33米。其中有7例患者完成了治疗10月的评估,与基线对比平均提升55.94米。6.患者基线时ALSFRS-r平均评分34.3±8.5,治疗后第2个月平均评分为34.96(平均差值 0.62[95%CI[0.98-1.14]),在治疗第 6 个月时平均分为 35.24(0.89[0.28-1.50]),第10个月平均分为34.78(0.89;[0.10-1.68]),与基线水平相比均稍有提升。7.有21例患者完成用力肺活量(Forced Vital Capacity,FVC)治疗第6个月和基线的对比,结果无统计学差异。16例患者完成全身骨密度(Total Body Less Head Bone Mineral Density,TBLH BMD)检查对比,6月治疗后Z值出现了有统计学意义的下降;Cell Cycle抑制剂腰椎骨密度(Lumbar Spine Bone Mineral Density,LS BMD)、全身脂肪百分比变化、相对骨骼肌质量指数(Relative Skeletal Muscle Index,RSMI)检测,对比治疗6月与基线均无统计学差异。8.队列中13例患者完成了治疗前和治疗6个月后CMAP波幅对比,正中神经CMAP波幅平均值较基线水平增加1.33mV,腓总神经平均值较基线水平增加1.38mV;而尺神经和胫神经CMAP波幅对比治疗前后没有统计学意义的改变。9.有2例伴有严重脊柱侧弯的成人SMA2型患者在超声引导下多次腰椎穿刺均未成功,经患者及家属知情同意后成功实施腰椎蛛网膜下腔Ommaya囊植入术,建立了永久性皮下鞘内注射给药通道。10.治疗相关不良事件:11例(37.9%)患者发生不良事件,总计44次(26.8%),其中头痛15次(34.1%)、头晕11次(25.0%)和恶心11次(25.0%)最常见。结论:1.规律鞘内注射诺西那生能有效改善我国青少年和成人SMA患者的运动功能且相对安全,但治疗6-10个月对限制性通气功能患者FVC改善不明确。2.6-10个月诺西那生的治疗不能明显改善SMA患者骨密度及身体成分。3.有限的病例表明对于穿刺困难或穿刺失败的患者,实施腰椎蛛网膜下腔Ommaya囊植入术以建立永久性皮下鞘内注射给药通道是安全可行的。

目的:初步探讨线粒体DNA(mtDNA)通过激活ZBP1诱导细胞泛凋亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法:1、使用mtDNA试剂盒分离提取mtDNA,并采用琼脂糖凝胶电泳对提取的mtDNA进行纯度检测,使用Nanno Drop2000对mtDNA进行浓度检测。2、使用终浓度1μg/ml的LPS以及终浓度为0.5μg/ml的mtDNA处理肺泡巨噬细胞12h,收集细胞,用q RT-PCR技术检测细胞IL-1β、IL-18以及TNF-α的m RNA水平变化,同时收集细胞上清液,采用ELISA检测上清液中IL-1β以及IL-18的含量变化。实验分组:Control组、LPS组、mtDNA组以及LPS+mtDNA组。3、按照上述分组,分别使用CCK8对细胞活力进行检测;LDH试剂盒对细胞上清液中的LDH水平进行检测;Calcei确认细节n/PI染色对细胞死亡情况进行检测。4、取脓毒症肺损伤小鼠的肺组织进行单细胞测序,并使用生物信息学方法对泛凋亡关键基因进行评分。5、使用Western Blot对细胞焦亡通路的Caspase-1、GSDMD蛋白,坏死性凋亡通路的p MLKL、p RIPK3蛋白以及凋亡通路的Caspase-3蛋白进行检测。6、分别使用q RT-PCR技术以及Western Blot检测上述分组中ZBP1分子的m RNA及蛋白水平变化。7、使用小干扰RNA技术转染si RNA-ZBP1抑制肺泡巨噬细胞中ZBP1的表达;按照LPS+mtDNA、si RNA-NC+LPS+mtDNA、si RNA-1+LPS+mtDNA、si RNA-2+LPS+mtDNA的实验分组,使用ELISA检测各组上清液中IL-1β、IL-18的分泌情况;通过Calcein/PI染色对细胞死亡情况进行检测;用Western Blot对Caspase-1、GSDMD、p MLKL、p RIPK3、Caspase-3蛋白进行检测。结果：1、琼脂糖凝胶电Medullary AVM泳后能看到分子量约为16.5Kb的单一条带,即为mtDNA;2、与Control相比,LPS组、mtDNA组以及LPS+mtDNA组细胞上清液中IL-1β、IL-18以及LDH水平都增高,并且LPS+mtDNA组要高于LPS组、mtDNA组;与Control相比,LPS组、mtDNA组以及LPS+mtDNA组细胞活力下降,死亡细胞比例增高,且LPS+mtDNA组要比LPS组、mtDNA组变化更为明显;与Control相比,LPS组Caspase-1、GSDMD以及磷酸化的RIPK3和MLKL蛋白表达增高,mtDNA组Caspase-1、GSDMD以及Caspase-3蛋白表达增高,LPS+mtDNA组Caspase-1、GSDMD、Caspase-3、p RIPK3、p MLKL蛋白表达均有增加;3、抑制ZBP1后,与LPS+mtDNA组相比,si RNA-1+LPS+mtDNA组与si RNA-2+LPS+mtDNA组细胞上清液中IL-1β、IL-18的含量下降;与LPS+mtDNA组相比,si RNA-1+LPS+mtDNA组与si RNA-2+LPS+mtDNA组细胞死亡比例下降,Caspase-1、GSDMD、Caspase-3Compound 3抑制剂、p RIPK3、p MLKL蛋白表达水平均下降。结论：mtDNA可能通过ZBP1诱导细胞泛凋亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应。

目的:为探究益气活血法治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用和机制,本研究通过建立氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞泡沫化模型,观察益气活血中药芪丹通脉片对巨噬细胞泡沫化的影响及其对泡沫化过程中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR pyrin domain containing 3,NLRP3)炎症小体信号通路、下游炎性因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)的影响,进一步揭示其抗炎、抗动脉硬化的作用机理。方Culturing Equipment法:培养RAW264.7细胞,随机分为对照组、ox-LDL诱导组、ox-LDL诱导+益气组、ox-LDL诱导+活血组、ox-LDL诱导+复方组(QDTM)、ox-LDL诱导+复方(QDTM)+si RNA组。各组细胞干预后进行泡沫化诱导,分析各组细胞油红染色阳性面积,计算各组细胞泡沫化诱导率,收集细胞,酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测炎症因子IL-1β及IL-18表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)分析各组细胞NLRP3、半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)的表达情况;免疫印迹法(Western-blot)分析各组细胞NLRP3、caspase-1的表达情况。结果:1.油红O染色结果:对照组正常的RAW264.7细胞基本没有油红O着色,其余各组经过泡沫化诱导后均出现不同程度的油红O着色。其中ox-LDL诱导组细胞油红O着色面积/细胞总面积比值最高,复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值最低;与对照组相比,ox-LDL诱导组细胞油红O着色面积/细胞总面积比值具有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL诱导组相比,益气组、活血组、复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值降低均具有统计学意义(P<0.05);与益气组相比,复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值降低均具有统计学意义(P<0.05);与活血组相比,复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值降低均具有统计学意义(P<0.05)。2.ELISA法检测结果:对照组中IL-1β及IL-18含量最低,与对照组相比其它各组的IL-1β及IL-18含量均升高;益气组、活血组、复方组、复方+si RNA组与ox-LDL诱导组相比IL-1β及IL-18含量降低具有统计学意义(P<0.05);与益气组及活血组相比,复方组与复方+si RNA组IL-1β及IL-18含量降低Berzosertib小鼠具有统计学意义(P<0.05)。3.Real-time RT-PCR检测结果:对照组的NLRP3m RNA、caspase-1m RNAPD0325901化学结构含量最低;ox-LDL诱导组NLRP3m RNA、caspase-1m RNA含量均最高。与ox-LDL诱导组相比,益气组、活血组、复方组、复方+si RNA组NLRP3m RNA、caspase-1m RNA水平均降低均具有统计学意义(P<0.05);与益气组、活血组相比,复方组及复方+si RNA组NLRP3m RNA、caspase-1m RNA含量均降低具有统计学意义(P<0.05)。4.Western-blot检测结果:ox-LDL诱导组NLRP3、caspase-1含量最高;与ox-LDL诱导组相比,其它各组的NLRP3、caspase-1含量均明显降低具有统计学意义(P<0.05);与益气组、活血组相比,复方组及复方+si RNA组NLRP3、caspase-1的含量降低具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.益气活血中药复方芪丹通脉片可以抑制巨噬细胞的泡沫化,降低由ox-LDL诱导的IL-1β、IL-18炎症因子的水平。2.益气活血中药复方芪丹通脉片可显著下调NLRP3、caspase-1的表达水平,抑制NLRP3介导的炎症反应,减少泡沫细胞的形成。3.益气活血中药复方芪丹通脉片的抗炎效果中,益气活血配伍作用优于单纯益气组、活血组。4.益气活血中药复方芪丹通脉片可能是通过NLRP3炎症小体抑制巨噬细胞泡沫化,减轻炎症反应,改善动脉粥样硬化斑块。

目的 探讨心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞焦亡的调控作用。方法46只SD大鼠，其中随机取6只大鼠为空白组，余40只经腹腔注射阿霉素药物建立慢性心衰模型，模型成功后将32只大鼠随机分为模型组12只、心康冲剂组10只、缬沙坦组10只。缬沙坦组以等效剂量0.03g/(kg·d)灌胃、心康冲剂组给予0.5g/(kg·d)等效剂量灌胃。空白组与模型组每日等量生理盐水灌胃，连续4周。实验结束后，心脏超声检测各组大鼠心功能，HE、Masson染色观察心脏组织形态，透射电镜下观察心肌组织超微结构，免疫组化法检测焦亡底物消皮素D-N端片段（gasderminD-N，GSDMD-N）表达，酶联免疫吸附法检测大鼠血清白介素1β（interleukin-1β，ILFerrostatin-1 MW-1β）、白介素18（interleukin-18，IL-18）表达，实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NOD-likereceptorthermalproteindomainassociatedprotein3，NLRP3）通路各mRNA，Westernblot法检测NLRP3通路各蛋白表达量。结果 与空白组相比，模型组大鼠左室射血分数(leftventricularejectionfractions，LVEF)、左心室短轴缩短率(leftventricularfractionalshortening，LVFS)均明显降低（P＜0.01），染色结果显示心肌细胞死亡增多、纤维化严重，且GSDMD-N焦亡蛋白表达在胞膜和胞浆，透射电镜结果显示模型组中心肌细胞膜有破裂，有孔隙形成，线粒体肿胀严重，血液中炎症因子IL-18、IL-1β明显升高（P＜0.01），心肌组织中NL确认细节RP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1（cysteine-containingaspartate-specificproteases-1，Caspase-1）、GSDMDmRNA及GSDMD-N蛋白表达均明显升高（P＜0.01）。与模型组相比，心康冲剂、缬沙坦干预后心肌细胞焦亡减轻，LVEF、LVFS都不同程度地增加（P＜0Biodiesel Cryptococcus laurentii.01）；染色及电镜结果显示心肌病理学损伤减轻；炎症因子IL-18、IL-1β及细胞焦亡通路NLRP3、Caspase-1、GSDMD/GSDMD-N的mRNA及蛋白都有所降低（P＜0.01）。结论 心康冲剂可改善慢性心力衰竭大鼠心功能，抑制NLRP3细胞焦亡通路及下游产物，从而减轻心肌炎症，防止慢性心衰中的心肌细胞死亡过多。

目的 检测阴茎癌患者癌组织及其配对癌旁组织中程序性细胞死亡因4(PDCD4)的表达水平,分析其差异表达的意义,探讨其作为诊断标志物和治疗靶点的可能性。方法 收集昆明医科大学第二附属医院2018年7月至2020年12月收治的15例阴茎癌患者癌组织及其配对癌旁组织,采用免疫组化、PCR(Q-PCR)和Western blotting等分子生物学技术检测PDCD4在组织中的表达水平及细胞定位。结果 免疫组化染色结果提示所有被检测组织中PDCD4蛋白阳性呈棕黄色,定位于细胞核和细胞质,且癌组织较癌旁中PDCD4阳性比率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Q-PCR和Western blotting结果表www.selleck.cn/products/chir-99021-ct99021-hcl明阴茎癌组织中medicine managementPDCD4在转录和翻译水平的表达均比癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDCD4在阴茎癌组织中较癌旁组织表达明显升高,表明PDCD4与阴茎癌的发生、发展存在一定关联,PDCD4可能成为阴茎癌诊PLX3397浓度疗的新型标志物和治疗靶点,其具体机制有待进一步研究。

最新数据统计结果表明,我国癌症的发病率和死亡率目前已位居全球第一。如何精准有效的对癌症进行治疗是我们亟待解决的问题。目前,传统的癌症治疗方法包括化疗、放疗、手术治疗等都存在诸多弊端,如靶向性差、毒副作用强、药物耐受性、癌细胞转移等,以致难以有效的对患者进行救治。因此,发展新型、高效且低毒副作用的肿瘤治疗方法,具有重要的科学意义和临床价值。作为新兴的治疗策略,免疫治疗的优势在于能激活体内免疫系统杀灭癌细胞,不仅能针对局部肿瘤病灶部位还能对转移的肿瘤细胞进行清除。此外,免疫疗法还可以激活免疫保护、长效免疫记忆,进而防止肿瘤复发。其中比较经典的是免疫检查点阻断剂(Immune checkpoint blockers,ICBIntegrated Immunology),它们在临床中已用于不同类型癌症如白血病及实体瘤的治疗,并展现出较好的治疗效果。但是,免疫治疗仍然面临一些巨大的挑战,如免疫治疗的单药有效率并不高,即使联合传统治疗,很大部分患者还是无法从中获益。另外,原发性、适应性及获得性耐药使免疫治疗的疗效不足或无效,进而导致肿瘤患者疾病复发。而且,免疫相关的不良反应也极大地限制了其临床的持续性应用。因此,基于新的分子机制作为靶点开发新型免疫治疗因子有望成为增强免疫治疗的新策略。N6-甲基腺苷(m~6A)-mRNA甲基化是存在于真核生物中重要的RNA修饰,参与DNA修复、细胞分化、周期、凋亡等基本生命活动,并在癌症的发生和发展中起到重要作用。m~6A-mRNA甲基化介导RNA稳定性、细胞代谢、基因表达等生物学功能受甲基化转移酶、去甲基化酶及m~6A结合蛋白三类调控因子动态调控。而这些调控因子可作为癌症新的靶点为抗癌药物开发提供新的切入点。不仅如此,靶向这些m~6A-mRNA甲基化调控因子如m~6A去甲基化酶抑制剂能改善肿瘤微环境中免疫系统的重塑进而增强免疫治疗的效果。目前,尽管针对m~6A-mRNA甲基化小分子抑制剂的研究取得了很大程度上的进展,但是,有效的靶向m~6A-mRNA甲基化的药物仍然匮乏,而且还处于初步研究阶段。不仅如此,目前存在的小分子抑制剂尽管能通过调控m~6A-mRNA甲基化,抑制靶基因的转录产物(Transcripts)稳定性,进而诱导细胞凋亡,但他们具有潜在的局限性如特异性问题,药物利用度问题,潜在的耐药问题等。针对这些问题,我们考虑是否能联合其他治疗策略实现更为有效的癌症治疗。生物体内源性的无机元素(如硒,铁,铜,锰等)在生命和疾病进程中扮演着重要角色,而外源性无机类小分子化合物如我们熟知的铂、砷药物已经作为一线药物被应用于各种类型癌症的治疗。无机纳米尺度药物由于极佳的比表面积、渗透性、吸收性、表面可修饰性、光学性质以及其自身生物活性,能实现对肿瘤从组织到细胞到分子的跨尺度干预作用。因此,本论文以恶性血液系统疾病白血病及实体瘤治疗为目标,以m~6A-mRNA甲基化表观转录分子调控事件为靶标,选择金纳米棒这种纳米材料进行设计、改造和优化,同时结合金属免疫疗法,概念性提出“纳米表观药物”的治疗策略,为癌症治疗提供新思路。第1章是绪论部分,主要介绍了目前癌症治疗现状及存在的问题,m~6A-mRNA甲基化的概念;m~6A-mRNA甲基化在癌症中的作用机制以及靶向策略;目前靶向m~6A-RNA甲基化存在的问题;无机纳米材料与癌症简介;金纳米与癌症治疗以及金纳米棒目前的治疗应用现状。第2、3、4章,针对急性髓系白血病(AML)细胞的特性,合成并筛选了对其摄取最佳尺度的金纳米棒,随后对其进行表面修饰壳聚糖和转铁蛋白受体的12肽(命名为GNR-CSP12)。通过化学及生物等表征验证GNR-CSP12的成功制备。功能方面,GNRa-CSP12具有靶向多种AML细胞的特异性,而对正常细胞未见明显毒性。机制方面,GNRa-CSP12能够通过结合白血病细胞内源性谷胱甘肽(GSH)改变细胞氧化/还原平衡:一方面使得AML细胞脂质过氧化水平升高激活铁死亡;另一方面,GNRa-CSP12能消耗内源性的Fe~(2+)转换为Fe~(3+),使得在AML高表达的Fe~(2+)依赖的m~6A-mRNA去甲基化酶FTO和ALKBH5活性被抑制,进而上调m~6A-mRNA甲基化,使得下游的信号通路如糖酵解(Glycolysis),乏氧(Hypoxia)及免疫检查点(ImmuFer-1分子量ne checkpoint)上相应的靶基因的mRNA稳定性降低。最后,拓展了GNRa-CSP12对白血病治疗的应用,进一步证明了GNRa-CSP12不仅能够克服m~6A-mRNA介导的白血病酪氨酸激酶抑制剂耐药,还能协同免疫检查点阻断剂提高白血病的免疫治疗效果,可作为一种潜在的免疫治疗药物。第5、6章,针对目前实体瘤中免疫治疗尤其是以免疫检查点(如PD1/PDL1)为靶点药物治疗中存在的疗效不高的问题,设计合成一种具有近红外II区吸收的金纳米棒光热复合材料(命名为GNR-si YTH1),它的组成为:表面修饰正电性的高分子聚合物PLA-PEI,中间由静电吸附作用装载m此网站~6A-mRNA甲基化阅读蛋白YTHDF1的si RNA,表面进一步修饰细胞核定位肽。论文从纳米材料的合成,表征,体外细胞实验及体内动物模型,对GNR-si YTH1的光热转换效率、光热免疫治疗效果以及长效的免疫保护性能进行定向研究。并验证了GNR-si YTH1光热免疫治疗系统的机制:在低温光热治疗的作用下,GNR-si YTH1能诱导肿瘤细胞免疫原性死亡并释放钙网蛋白(Calreticulin,CRT),高迁移率族蛋白1(HMGB1)和三磷酸腺苷(ATP)等损伤相关分子模式(Damage-associated molecular patterns,DAMP),并通过调控树突细胞中溶酶体组织蛋白酶(CTSB)的表达进一步促进树突细胞成熟和CD8~+T细胞的交叉启动,增强T细胞活性。不仅如此,GNR-si YTH1介导的低温光热免疫治疗显著激活效应记忆型T细胞。这种由m~6A-mRNA甲基化介导的光热免疫治疗系统为抗肿瘤免疫治疗提供新思路。第7章,总结了本论文的研究内容及科学意义,并展望了未来基于表观遗传调控的纳米治疗策略继续深入发展的研究方向。

目的 探讨苦参碱对人乳突状卵巢腺癌（POAC）细胞增殖和凋亡的影响，并研究核转录因子kappa-B(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法 体外培养POAC细胞株Caov-3，selleckchem Naporafenib根据不同药物处理，共分为9组：对照组（不用药）、0.5 g/L组（0.5 g/L苦参碱用药）、1.0 g/L组（1.0 g/L苦参碱用药）、1.5 g/L组（1.5 g/L苦参碱用药）、2.0 g/L组（2.0 g/L苦参碱用药）、2.5 g/L组（2.5 g/L苦参碱用药）、阳性对照组（1μg/mL紫杉醇用药）、2.0 g/L+抑制剂组（2.0 g/L苦参碱和20μmol/L BAAZD1152-HQPA临床试验Y11-7082联合用药）和2.0 g/L+激动剂组（2.0 g/L苦参碱和5μmol/L Prostratin联合用药）。分别用细胞计数试剂盒-8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷试剂盒、Hoechst 33258染色试剂盒检测细胞活力、增殖和凋亡；用蛋白免疫印迹法检测蛋白表达。结果 与对照组相比，2.0g/L组的相对细胞活力、增殖率和增殖细胞核抗原（PCNA）、磷酸化的NF-κB抑制蛋白alpha(p-IκBα)、磷酸化的NF-κB p65(Immunoassay Stabilizersp-NF-κB p65)的蛋白相对表达量均显著降低（P<0.05），而凋亡率、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）大片段的蛋白相对表达量则显著提高（P<0.05）。与2.0 g/L组比较，相对细胞活力、增殖率和PCNA、p-IκBα、p-NF-κBp65的蛋白相对表达量在2.0g/L+抑制剂组均较低，而在2.0g/L+激动剂组均较高（P<0.05），而凋亡率、PARP大片段的蛋白相对表达量在2.0 g/L+抑制剂组较高，而在2.0 g/L+激动剂组则较低（P<0.05）。结论 苦参碱可能通过NF-κB通路活化而抑制POAC细胞增殖并诱导其凋亡。

目的：探讨埃索美拉唑联合表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、迁移、凋亡、自噬的影响与分子机制。方法：实验分为空白对照组、埃索美拉唑组、AG1478组和埃索美拉唑联合AG1478组，采用CCK-8法、EdU增殖实验、Transwell、划痕实验、流式细胞术、细胞免疫荧光法分别检测各组人胃癌AGS、SGC-7901细胞活力、增殖、迁移、凋亡和自噬变化。Western blotting检测EGFR、c-MYC、P53、cleaved-PARP、LC3B、PI3K、AKT、P-AKT蛋白的表达情况。Congenital CMV infection结果：AG1478抑制胃癌细胞活力和EGFR表达呈浓度依赖性。埃索美拉唑和AG1478能够明显降低胃癌细胞活力、抑制其增殖和迁移，诱导细胞凋亡和自噬（P＜0.05），且两者联合有协同作用（P＜0.05）。LBH589溶解度埃索美拉唑和AG1478均能IDN-6556降低AGS和SGC-7901细胞PI3K、AKT、P-AKT蛋白的表达（P＜0.05），两者联合对降低P-AKT的表达有协同作用（P＜0.05）。结论：埃索美拉唑联合EGFR抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、迁移有抑制作用，且二者协同诱导细胞凋亡和自噬，两者联合可能是一种潜在的个体化治疗策略。

目的 分析济宁市兖州区2～7岁儿童缺铁性贫血(iron-deficient anemia, IDA)情况及其危险因素，为防治2～7岁儿童IDA提供决策依据。方法 连续纳入2018年1月至2022年12月在本单位体检的22360名2～7岁儿童，记录其人口学、体格检查、分娩状况、出生体重、喂养方式、饮食习惯、添加Cell Isolation辅食、血常规等资料，用χ~2检验进行数据分析，用logistic回GSK1349572体内归分析筛选IDA的独立危险因素。结果 22360名2～7岁儿童共检出IDA 810例，患病率为3.62%,其中轻、中度贫血分别为798例(3.57%)、12例(0.05%),无重度贫血；农村儿童IDA患病率与城镇儿童无统计学差异(χ~2=1.724,P=0.189);男、女童的IDA患病率差异无统计学意义(χ~2=0.098,P=0.755)。2岁～儿童IDA患病率最高(5.3%),随年龄增长Ceralasertib纯度，IDA患病率呈下降趋势。年龄(2岁～)、人工喂养、不及时添加辅食、挑食偏食、早产是2～7岁儿童IDA的独立危险因素。结论 平衡饮食、预防早产是降低2～7岁儿童IDA发病率的关键。为今后IDA防治提供了理论依据。

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦钠片联合重组人脑利钠肽(rhBNP)对慢性心衰患者左确认细节室射血分数(LVEF)及血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、血管紧张素(AngⅡ)水平的影响。方法 选取2019年2月至2022年2月焦作市第五人民医院收治的86例慢性心衰患者为研究对象，随机分为两组。43例观察组患者接受沙库巴曲缬沙坦钠片联合rhBNP治疗，43例对照组患者仅接受沙库巴曲缬沙坦钠片治疗。比较两组患者治疗前后左心功能与血清NT-proBNP、AngⅡ水平及疗效与不良反应。结果 两组治疗后LVEF水平升高，左心室舒张末期内径(LVEDD)降低，且观察组LVEF高于对照组LVEF,观察组LVEDD低于对照组LVEDD(P<0.05)。治疗后两组患者血清NT-proBNP、AngⅡ水平均降低，且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后观察组患者总有效率[97.67%(42/43)]高于对照组[83.72%(36/43)](P<0.05selleck激酶抑制剂)。治疗后观察组不良反应发生率[6.98%New Rural Cooperative Medical Scheme(3/43)]低于对照组[11.63%(5/43)],但两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 沙库巴曲缬沙坦钠片联合rhBNP治疗慢性心衰，可有效改善患者临床症状，改善心功能，安全性较高，值得临床推广。